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动物组织中氯霉素类药物多残留确证分析方法的研究

摘要：本研究旨在建立准确、灵敏的动物组织中氯霉素类药物多残留确证分析方法。通过对样品前处理条件的优化，包括提取溶剂、净化方式等，结合气相色谱-质谱联用（GC-MS）和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，对氯霉素（CAP）、甲砜霉素（TAP）、氟苯尼考（FF）及其代谢物氟苯尼考胺（FFa）进行检测。实验结果表明，所建立的方法在不同动物组织中具有良好的回收率和精密度，检测限和定量限满足残留分析要求，可用于动物组织中氯霉素类药物多残留的准确检测与确证。

一、引言

氯霉素类（Chloramphenicols，CAPs）药物曾因其广谱抑菌性在兽医领域广泛应用，然而，其具有严重的毒性作用，如对人体骨髓造血机能有抑制作用，可引发血小板减少性紫癜、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血等严重疾病。即便微量残留于动物性食品中，也会对人体健康造成潜在危害。随着人们对食品安全关注度的不断提高，对动物性食品中氯霉素类药物残留的监控愈发严格。因此，建立可靠的多残留确证分析方法，对于保障食品安全、维护消费者健康以及促进畜牧业的可持续发展具有重要意义。

二、材料与方法

2.1材料

2.1.1试剂与药品

氯霉素（CAP）、甲砜霉素（TAP）、氟苯尼考（FF）、氟苯尼考胺（FFa）标准品，纯度均≥98%；乙酸乙酯、正己烷、乙腈、甲苯等有机溶剂均为色谱纯；OasisMCX固相萃取柱；N,O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺（BSTFA）-三甲基氯硅烷（TMCS）（99+1，v/v）硅烷化试剂；间硝基氯霉素（m-CAP）内标；氘代氯霉素（d5-CAP）内标。

2.1.2仪器设备

气相色谱-质谱联用仪（GC-MS，配备负化学电离源NCI）；液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS，配备电喷雾电离源ESI）；高速冷冻离心机；漩涡振荡器；氮吹仪；固相萃取装置。

2.2方法

2.2.1样品前处理

以虾和鸡肌肉为例，将匀浆后的组织样品加入适量碱化的乙酸乙酯，振荡提取一定时间，使氯霉素类药物从组织中溶出。随后，加入正己烷进行脱脂处理，通过离心分层去除上层的脂肪层。收集下层液体，用OasisMCX固相萃取柱进一步净化，依次用合适的溶剂淋洗柱子以去除杂质，最后用乙腈洗脱目标药物。收集洗脱液，在氮吹仪上吹干后，以乙腈作反应介质，加入适量的BSTFA+TMCS进行硅烷化处理（用于GC-MS分析），或者直接复溶后用于LC-MS/MS分析。

2.2.2GC-MS分析条件

色谱柱选择DB-5MS毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）。初始温度设定为50℃，保持1min后，以15℃/min的速率升温至300℃，并维持5min。进样口温度为250℃，不分流进样。载气为高纯氦气，流速1.0mL/min。采用负化学电离源（NCI），离子源温度150℃，反应气为甲烷。选择离子监测（SIM）模式下，CAP、TAP、FF、FFa和m-CAP的选择离子分别设定为特定的质荷比（m/z），如m/z376、378、466*、468（CAP），m/z409*、411、499、501（TAP），m/z339、341、429*、431（FF），m/z109、209*、211、229（FFa）和m/z432、466*、468、470（m-CAP），其中*为定量离子。

2.2.3LC-MS/MS分析条件

液相色谱柱采用C18反相柱（2.1mm×100mm，1.7μm）。流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈，采用梯度洗脱程序。柱温35℃，进样量5μL。电喷雾电离源（ESI）采用正离子模式，喷雾电压、毛细管温度等参数进行优化。以CAP、TAP、FF、FFa和d5-CAP分别以m/z321、354、356、248和326为母离子，选择特定的产物离子作为质谱检测的确证和定量离子，如m/z152和257（CAP），m/z185和290（TAP），m/z185和336*（FF），m/z130和230*（FFa），m/z157*（d5-CAP），其中*为定量离子。

2.2.4方法学验证

在虾和鸡肌肉样品中添加不同浓度水平的CAP、TAP、FF和FFa标准品，按照上述优化的前处理方法和仪器分析条件进行测定，计算回收率、变异系数，确定方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ）。同时，考察方法的线性范围，绘制标准曲线并计算线性相关系数。

三、结果与讨论

3.1方法的回收率和精密度

在虾肌肉添加浓度0.1-1