产淀粉酶芽孢杆菌的筛选.pptxVIP

产淀粉酶芽孢杆菌的筛选实验组：三组

淀粉酶的作用及来源2目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物，并集中在几种细菌和真菌中，尤其以芽孢杆菌所产的淀粉酶较多。其原因首先芽孢杆菌属(Bacillus)中能产生淀粉酶的菌种较多;其次，芽孢杆菌属产的淀粉酶有较好的应用价值，如凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌产的淀粉酶具有耐热性;再次，芽孢杆菌应用历史悠久，广泛用于饲料添加剂，其安全性有保证。

实验材料3实验仪器：磁力搅拌器、水浴锅、移液枪、恒温箱、超净工作台、摇床、涂布棒、接种环、枪头200μL、显微镜、牙签（需灭菌）实验试剂：无菌水、淀粉、酵母膏、蛋白胨、MgSO4·7H2O、Na2HPO4、琼脂、卢戈氏碘液、NaCl、碘、碘化钾

实验方法4采用初筛、复筛得到理想的菌种。

实验步骤5土样采集从面粉厂附近采集土壤表层土样，去除表层土，在表层土下５到10ｃｍ处取样，用无菌器具采样并装入袋中，记录采样时间，地点，环境等，带回实验室。产淀粉酶菌株的初筛称取土样1g，放于300mL无菌水中打散，制成菌悬液，将菌悬液置于80℃水浴20min，梯度稀释至10－5。取200μL10-3、10-4和10－5菌悬液涂布于筛选培养基上，37℃培养48h。根据菌落形态筛选：待长出菌落后，先进行菌落形态观察，有芽孢的细菌往往长出外观粗糙、“干燥”、不透明且表面多褶的菌落。从而去除放线菌、真菌等杂菌的影响。

实验步骤6根据是够产生淀粉水解圈筛选：在菌落周围滴加卢戈氏碘液，观察菌落周围是否出现透明水解圈，（如果担心碘液会将菌种杀死，则采用点种法将菌种接种到另外一个培养基上）并测定菌落及水解圈直径，计算其比值(HC比值)。挑取HC比值较大的8个不同的单菌落，进行斜面培养，作为初筛菌种编号保藏。（斜面培养基依然采用淀粉筛选培养基）

实验步骤7产淀粉酶菌株的复筛将初筛得到的8个菌株在筛选培养基上划线分离，37℃培养24~48h，长出单菌落后，选择直径为1mm的单菌落，滴加卢戈氏碘液，观察是否有透明水解圈，选取HC值较大的菌种作为复筛菌株即实验菌株，进行菌种鉴定。菌种的鉴定对所筛选的菌种进行革兰氏染色、芽孢染色，通过显微观察及菌落形态进行鉴定，得到最终的目的菌种。具体实验方法参考微生物实验课本。

菌种保藏8菌种保藏将初步鉴定好的菌种接种在sday斜面培养基上，在37℃的恒温培养箱中培养，待其长满菌丝后。放在4℃冰箱中进行菌种保藏。

培养基配方9培养基的配方：01筛选培养基:淀粉20.0g，酵母膏5.0g，蛋白胨10g，Na2HPO45.0g，MgSO4·7H2O0.1g，NaCl0.1g，琼脂20.0g，水1000mL，pH7.0－7.4。02Sday培养基配方：葡萄糖、酵母浸膏、琼脂03

注意事项10采样时应该尽可能保持相对无菌。01所采集的样本必须具有某种代表性。02采好的样必须完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等；03注意采样的季节性和时间因素；04及时处理采好的样，暂时不能处理的应该贮藏4℃下，但贮存时间不宜过长。05

参考文献11参考文献：唐丽江，王振华，王迪．高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的筛选［J］．安徽农业科学，2009，(12)．张双民．土壤中淀粉酶高产菌株的分离及产酶条件的优化［J］．土壤肥料，2006，(2)．刘雅琴，陈海魁，孔令全．α－淀粉酶产生菌的分离筛选与诱变选育［J］．畜牧与饲料科学，2010，(9)．徐琛．产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离［J］．齐鲁师范学院学报，2011，26(5):144-146．来航线，杨保伟，邱学礼，薛泉宏．9株芽孢杆菌的初步分离鉴定与拮抗性试验［J］．西北农林科技大学学报，2004，32(7):93-96．