第2章样品处理技术.pptVIP

******（1）小型离心机-每分钟几千转到几万转，数百微升到数十毫升。（2）离心的体积较多，机型体积较大的落地式离心机。最大转速6000r/min左右，最大容量可以达到500ml。（3）离心速度比（2）高，最大速度在18000-21000r/min左右。主要用于细胞及亚细胞结构的分离。（4）最大速度可达到100000r/min左右。适用于蛋白质、核酸和多糖等生物大分子的制备。（5）主要用于生物大分子定性、定量、分析得超速离心机。最大转速为80000r/min.（6）主要用于处理发酵液等特大体积，浓度较稀的样液。***************************2.1细胞分离和破碎方法2.1.2细胞破碎许多生物产物在细胞培养过程中不能分泌到胞外的培养液中，而保留在细胞内。例如：青霉素酰化酶、碱性磷酸酶等胞内酶；部分外源基因表达产物；植物细胞产物等。细胞破碎就是使目标产物选择性地释放到液相中，然后破碎的细胞或其碎片利用前面讲到的固液分离方法（主要是离心法）除去，这样得到的上清液才能用于进一步的分离纯化。第29页，共55页，星期日，2025年，2月5日2.1细胞分离和破碎方法动物细胞：没有细胞壁，只有细胞膜，易于破碎植物细胞和微生物细胞：细胞膜外有一层坚固的细胞壁，破碎困难破碎细胞的目的就是使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏（增大通透性）或破碎，释放其中的目标产物。第30页，共55页，星期日，2025年，2月5日2.1细胞分离和破碎方法2.1.2.1细胞破碎原理细胞破碎主要采用各种机械破碎法和化学破碎法，或机械破碎法和化学破碎法的结合。机械破碎法：细胞所受的机械作用力主要有压缩力和剪切力。化学破碎法：又称化学渗透，是利用化学或生化试剂（酶）改变细胞壁或细胞膜的结构，增大胞内物质的溶解速率；或者完全溶解细胞壁，形成原生质体后，在渗透压作用下使细胞膜破裂而释放胞内物质。第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日2.1细胞分离和破碎方法2.1.2.2细胞破碎法机械破碎：1.高压匀浆2.珠磨3.撞击破碎4.超声波破碎法化学和生物化学渗透：1.酸碱处理2.化学试剂处理3.酶溶物理渗透法：1.渗透压冲击法2.冻结-融化法强烈温和温和第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日2.1细胞分离和破碎方法2.1.2.3选择细胞破碎法的原则（1）仅破坏或破碎存在目标产物的位置周围目标产物存在于细胞膜附近时，可以采用较温和的方法；目标产物存在于细胞质内时，则需要采用强烈的机械破碎法。（2）选择性溶解目标产物目标产物处于与细胞膜或细胞壁结合的状态时，要调整溶液pH、离子强度或添加目标产物具有亲和性的试剂如螯合剂、表面活性剂等，使目标产物容易释放。注意使用的溶液性质应使其他杂质不易溶出。第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日2.1细胞分离和破碎方法2.1.2.4超声破碎法与超声破碎仪介绍超声波破碎法：利用发射15~25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液。超声破碎机理：在超声波作用下液体发生空化作用，空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。超声波细胞破碎效率：与细胞种类、浓度和超声波的声频、声能有关。超声波破碎法是很强烈的破碎方法，适用于多数微生物的破碎。超声破碎法的有效能量利用率极低，操作过程产生大量的热，因此操作需要在冰水或有外部冷却的容器中进行。由于对冷却的要求相当苛刻，所以不易放大，主要用于实验室规模的细胞破碎。第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日2.1细胞分离和破碎方法超声波细胞破碎仪原理：将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质(如水)而变成一个个密集的小气泡，这些小