固定化酶和固定化细胞课件.pptVIP

4.4.1固定化酶的形狀固定化酶的形式多樣，依不同用途有顆粒、線條、薄膜和酶管等形狀。其中顆粒占絕大多數，它和線條主要用於工業發酵生產，如裝成酶柱用於連續生產，或在反應器中進行批式攪拌反應；薄膜主要用於酶電極，應用於分析化學；酶管機械強度較大，亦宜用於工業生產。4.4.2固定化酶的性質酶在水溶液中以自由的游離狀態存在，但是固定後酶分子便從游離的狀態變為牢固地結合於載體的狀態，其結果往往引起酶的性質的改變。為此，在固定化酶的應用過程中，必須瞭解固定化酶的性質與游離酶之間的差別，並對操作條件加以適當調整。由於固定化的方法不同，固定化酶的活力和性質也有所不同。4.4.3酶活力固定化酶的活力在多數情況下比天然酶的活力低，其原因可能是：①酶活性中心的重要氨基酸殘基與水不溶性載體相結合；②當酶與載體結合時，它的高級結構發生了變化，其構象的改變導致了酶與底物結合能力或催化底物轉化能力的改變；③酶被固定化後，雖不失活，但酶與底物間的相互作用受到空間位阻的影響。也有在個別情況下，酶經固定化後其活力升高，可能是由於固定化後酶的抗抑能力提高使得它反而比游離酶活力高。4.4.4固定化酶的穩定性游離酶的一個突出缺點是穩定性差，而固定化酶的穩定性一般都比游離酶提高得多，這對酶的應用是非常有利的。其穩定性增強主要表現在如下幾個方面：（1）操作穩定性酶的固定化方法不同，所得的固定化酶的操作穩定性亦有差異。固定化酶在操作中可以長時間保留活力，一般情況下，半衰期在一個月以上，即有工業應用價值。（2）貯藏穩定性固定化可延長酶的貯藏有效期。但長期貯藏，活力也不免下降，最好能立即使用。如果貯藏條件比較好，亦可較長時間保持活力。例如，固定化胰蛋白酶，在0.0025mol/L磷酸緩衝液中，於20℃保存數月，活力尚不損失。（3）熱穩定性熱穩定性對工業應用非常重要。大多數酶在固定化之後，其熱穩定性都有所提高，但也有一些酶的耐熱性反而下降。一般採用吸附法來進行酶的固定化時，有時會導致酶熱穩定性的降低。（4）對蛋白酶的穩定性酶經固定化後，其對蛋白酶的抵抗力提高。這可能是因為蛋白酶是大分子，由於受到空間位阻的影響，不能有效接觸固定化酶。例如，千畑一郎發現，用尼龍或聚脲膜包埋，或用聚丙烯醯胺凝膠包埋的固定化天門冬醯胺酶，對蛋白酶極為穩定，而在同一條件下，游離酶幾乎全部失活。另外固定化後酶對有機試劑和酶抑制劑的耐受性也得到了提高。（5）酸堿穩定性多數固定化酶的酸堿穩定性高於游離酶，穩定pH範圍變寬。極少數酶固定化後穩定性下降，可能是由於固定化過程使酶活性構象的敏感區受到牽連而導致的。4.4.5固定化酶的反應特性固定化酶的反應特性，例如，底物特異性、酶反應的最適pH、酶反應的最適溫度、動力學常數、最大反應速度等均與游離酶有所不同。（1）底物特異性固定化酶的底物特異性與底物分子量的大小有一定關係。一般來說，當酶的底物為小分子化合物時，固定化酶的底物特異性大多數情況下不發生變化。例如，氨基醯化酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖異構酶等，固定化前後的底物特異性沒有變化；而當酶的底物為大分子化合物時，如蛋白酶、α-澱粉酶、磷酸二酯酶等，固定化酶的底物特異性往往會發生變化。這是由於載體引起的空間位阻作用，使大分子底物難以與酶分子接近而無法進行催化反應，酶的催化活力難以發揮出來，催化活性大大下降；而分子量較小的底物受到空間位阻作用的影響較小，與游離酶沒有顯著區別。酶底物為大分子化合物時，底物分子量不同，對固定化酶底物特異性的影響也不同，一般隨著底物分子量的增大，固定化酶的活力下降。例如，糖化酶用CMC疊氮衍生物固定化時，對分子量8000的直鏈澱粉的活性為游離酶的77％，而對分子量為50萬的直鏈澱粉的活性只有15%～17％。（2）反應的最適pH酶被固定後，其最適pH和pH曲線常會發生偏移，原因可能有以下三個方面：一是酶本身電荷在固定化前後發生變化；二是由於載體電荷性質的影響致使固定化酶分子內外擴散層的氫離子濃度產生差異；三是由於酶催化反應產物導致固定化酶分子內部形成帶電荷微環境。產物性質對固定化酶的最適pH的影響，一般來說，產物為酸性時，固定化酶的最適pH與游離酶相比升高；產物為鹼性時，固定化酶的最適pH與游離酶相比降低。這是由於酶經固定化後產物的擴散受到一定的限制所造成的。當產物為酸性時，由於擴散限制，使固定化酶所處微環境的pH與周圍環境相比較低，需提高周圍反應液的pH值，才能使酶分子所處的催化微環境達到酶反應的最適pH，因而，固定化酶的最適pH比游離酶的最適pH高一些；反之，產物為鹼性時，固定化酶的最適pH比游離酶的pH為低。（3）反應的最適溫度固定化酶的最適反應溫度多數較游離酶高，如色氨酸酶經共價結