基因工程第四章课时.pptVIP

4.2.1限制性内切酶的发现和功能4.2切割DNA的酶-限制性内切酶20世纪50年代宿主调控性限制第28页，共65页，星期日，2025年，2月5日4.2.1限制性内切酶的发现和功能4.2切割DNA的酶-限制性内切酶第29页，共65页，星期日，2025年，2月5日1970年H.O.Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶。WernerArber理论预见限制酶DanielNathans用限制酶切得SV40DNA片断HamiltonO.Smith得到第一个限制酶1978年Nobel生理或医学奖4.2.1限制性内切酶的发现和功能4.2切割DNA的酶-限制性内切酶第30页，共65页，星期日，2025年，2月5日目前为止，在细菌中已经发现了1200多种限制性内切酶，分为三类：其识别位点与切割位点相距1000-5000bp，切割位点不表现严格的特异性；2条链上的断裂位点相距70-75个核苷酸；识别序列具有特异性，且序列为旋转对称性，切割位点位于限制性内切酶识别序列之内，限制性内切酶的功能核甲基化酶的功能分开；是基因工程中常用的内切酶；由R、MS亚基共同组成，其中MS亚基具有位点识别和甲基化修饰的双重功能；R亚基具有内切酶活性。切割位点位于识别位点的一侧若干碱基对处，无序列特异性，而只与识别位点的距离有关，从7-26bp不等。在与识别位点结合之后，修饰作用和限制作用取决于两个亚基之间的竞争。限制性内切酶的分类4.2.1限制性内切酶的发现和功能4.2切割DNA的酶-限制性内切酶第31页，共65页，星期日，2025年，2月5日I和III型酶识别序列特点：?一般具有内切酶和甲基化酶的活性，?识别或切割位点不恒定，?不具备用来做工具酶，II型酶识别序列特点：?均有严格的识别特定核苷酸的序列，?识别的核苷酸序列一般在4－8个碱基对?大多数识别位点具有180度旋转对称的结构形式4.2.1限制性内切酶的发现和功能4.2切割DNA的酶-限制性内切酶第32页，共65页，星期日，2025年，2月5日4.2切割DNA的酶-限制性内切酶4.2.2限制性内切酶II在特定核苷酸序列处切割DNA第33页，共65页，星期日，2025年，2月5日4.2切割DNA的酶-限制性内切酶4.2.2限制性内切酶II在特定核苷酸序列处切割DNA命名：400余种II类酶，鉴定的识别和切割位点有300多种，商品化100多种，DNA重组技术中常用的有20多种。其命名书写规则：以生物体属名的第一个大写字母和种名的前2个小写字母构成酶的基本名称；若酶在一个特殊菌株上发现，则将株名的第一个字母加在基本名称之后；若酶的编码基因位于噬菌体（病毒）或质粒上，则还用一个大写字母表示这些非染色体的遗传因子；酶最后的部分为罗马字母，表明该生物发现此酶的先后顺序。如HindIII表明在Heamophilusinfluenzaed菌株种发现的第3种酶；EcoRI表明在Escherichiacoli的抗药性R质粒上发现的第一个酶第34页，共65页，星期日，2025年，2月5日4.2切割DNA的酶-限制性内切酶4.2.2限制性内切酶II在特定核苷酸序列处切割DNA第35页，共65页，星期日，2025年，2月5日4.2切割DNA的酶-限制性内切酶4.2.2限制性内切酶II在特定核苷酸序列处切割DNAII型限制性核酸内切酶的基本特性识别双链DNA分子中4-8对碱基的特定序列大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧识别切割序列呈典型的1800旋转对称型回文结构5‘…GCTGAATTCGAG…3’3‘…CGACTTAAGCTC…5’EcoRI的识别序列第36页，共65页，星期日，2025年，2月5日4.2切割DNA的酶-限制性内切酶4.2.2限制性内切酶II在特定核苷酸序列处切割DNA回文结构如HindIII—AAGCTT——TTCGAA—HapII—CCGG——GGCC—Cfr13I—GGNCC——CCNGG—Eco81I—CCTNAGG—