激活纹状体小清蛋白中间神经元改善化疗诱导肌肉萎缩的初步研究.pdfVIP

摘要

研究背景

作为抗击肿瘤的关键方法，化疗为许多患者提供了治疗机会。然而，这一过

程可能伴随着肌肉消耗等不良反应，这对患者的日常生活和治疗效果构成了挑战。

运动是改善肌肉萎缩的重要手段，研究表明，纹状体在运动调节中发挥至关重要

的作用，激活纹状体中的小清蛋白（Parvalbumin,PV）神经元可以促进运动状态

的短期变化。然而，目前尚不清楚长期干预PV中间神经元对运动和肌肉萎缩的

影响。本研究旨在：

1、观察化疗药物顺铂（Cisplatin,CDDP）对小鼠的体重、肌肉力量、肌肉功

能、肌肉质量以及肌纤维形态学的影响；

2、探讨化学遗传激活纹状体中PV中间神经元对于运动状态以及CDDP

诱导肌肉萎缩的影响；

3、验证运动对于CDDP产生的肌肉萎缩作用的影响。

研究方法

1、首先构建CDDP诱导的肌肉萎缩模型并做行为学及组织学评价。验证

CDDP对于小鼠的体重以及肌肉相关指标（如肌肉力量、肌肉功能、肌肉质量

以及肌纤维形态学）的影响。实验设计包括生理盐水注射的对照组（CON组）

和CDDP注射的实验组（CIS组），每组小鼠n=6只，每只小鼠接受的注射药

物量为3mg/kg，每日进行一次注射，持续一周。评价指标为每日对小鼠进行体

重测量，并据此计算体重比（每日体重/初始体重）；实验开始前后（第0天和

第7天）进行前/四肢抓力实验测量小鼠抓力，同时计算相对抓力（抓力/体重）

作为肌肉力量评价指标；前肢悬吊实验和倒置网格实验量化小鼠的前肢/四肢肌

肉功能；以上行为学实验完成后，对小鼠进行CO2处死，并通过心脏灌流固定

肌肉组织，按照肌肉走行依次取下小鼠股四头肌（Quadricepsfemoris,Qua）、

腓肠肌（Gastrocnemius,Gas）和胫骨前肌（Tibialisanteriormuscles,TA），称取

各肌肉湿重，计算湿重比（肌肉湿重/体重）；随后对肌肉进行苏木精-伊红

（HematoxylinandEosin,HE）染色，量化肌纤维形态学和横截面积的变化，从

而验证肌肉萎缩模型的建立是否成功。

2、其次使用化学遗传学方法激活小鼠纹状体中的PV中间神经元，观察其

对CDDP诱导肌肉萎缩小鼠的行为学及组织学变化。首先对hM3Dq转基因小

鼠进行脑立体定位注射，将对照病毒（CONV组）与rAAV-PV-CRE病毒（PV–

cre组）分别注入小鼠的纹状体区域，每组小鼠n=6只。其中rAAV-PV-CRE病

毒可以特异性转染PV中间神经元，并可经由药物氯氮平一氧化氮（Clozapine

N-oxide,CNO）特异性激活。术后恢复和病毒表达3周后，使用CDDP构建肌

肉萎缩模型，同时每天注射两次CNO（1mg/kg），持续7天。使用与肌肉萎缩

实验中相同的行为学和组织学实验方法测量肌肉萎缩的相关表现，并执行旷场实

验以观察纹状体PV中间神经元的干预对运动状态（移动距离）和情绪状态的影

响。以此来评估化学遗传激活纹状体中PV中间神经元对于运动状态以及

CDDP诱导肌肉萎缩的影响。

3、最后验证运动对于CDDP产生的肌肉萎缩作用的影响。实验分为安静对

照组（CISC组）和运动干预组（CISE组），每组小鼠n=5只。在使用CDDP

诱导出小鼠的肌肉萎缩模型的基础上，对CISE组施加坡度为15°，最高速度为

16m/min，单天时长为60min（30min×2），总时长为7天的短期跑台运动干预；

CISC组将小鼠放入跑台中，允许小鼠在跑台中自由活动，但不启动跑台电机，

实验时长与CISE组保持一致。评价指标采用与肌肉萎缩模型构建实验中相同

的行为学以及组织学方法，评估短期运动干预对CDDP诱导的肌肉萎缩的影响。

研究结果

1、为期7天的CDDP注射（3mg/kg）能够使得小鼠出现肌肉萎缩。具体

表现为CIS组小鼠与CON组相比，在注射后第一天体重比就出现显著性差异

（p0.01），直至实验结束；与CON组相比，抓力在CIS组小鼠的前肢和四

肢中均表现显著下降（p=0.0110,p0