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解析MARK途径下RON介导MDCK细胞上皮-间质转化的分子密码

一、引言

1.1研究背景

1.1.1上皮-间质转化（EMT）概述

上皮-间质转化（Epithelial-MesenchymalTransition，EMT）指在特定生理和病理条件下，具有极性的上皮细胞向具有移行能力的间充质细胞发生转化的现象。这一过程在胚胎发育、组织修复、肿瘤侵袭和转移等生物学进程中发挥关键作用。

在胚胎发育阶段，EMT对胚胎三胚层结构的形成、器官形成、胚层分化以及神经系统分化等都至关重要。例如，在原肠胚形成过程中，上皮细胞通过EMT转化为间充质细胞，进而迁移到特定位置，为后续组织和器官的发育奠定基础；在四肢发育中，EMT参与了肢体芽的形成和分化，使得细胞获得迁移能力，构建出四肢的基本结构。在器官形成方面，肺、肾、胃、心等器官的发育都离不开EMT过程中细胞的形态和功能转变。

在肿瘤领域，EMT被认为是肿瘤侵袭和转移的关键步骤。肿瘤细胞通过发生EMT，获得间质细胞特性，如细胞间黏附力减弱、细胞极性消失、细胞运动性增强等，从而能够脱离原发肿瘤病灶，降解细胞外基质穿透基底膜，进入血管或淋巴管，最终在其他器官或组织形成转移灶。众多研究表明，在肿瘤发生转移前，普遍存在EMT现象，且与肿瘤的恶性程度、预后密切相关。如乳腺癌、肺癌、结直肠癌等多种上皮来源的肿瘤中，EMT相关标志物的表达变化常被用于评估肿瘤的侵袭和转移潜能。

鉴于EMT在正常生理过程和重大疾病中的重要作用，深入研究其分子机制具有重大意义。明确EMT的调控机制，不仅有助于我们更深入理解胚胎发育的奥秘，为发育生物学领域提供理论支持；还能为肿瘤等疾病的防治提供新的靶点和策略，如开发针对EMT关键分子的抑制剂，有望阻断肿瘤细胞的转移，提高肿瘤患者的生存率和生活质量。

1.1.2MDCK细胞与EMT研究

MDCK细胞系（Madin-Darbycaninekidneycells）于1958年由Madin和Darby从美国CockerSpaniel母曲架犬的肾脏组织分离培育建立，是一种通常以贴壁方式生长的上皮样细胞。在EMT研究中，MDCK细胞具有诸多优势，使其成为常用的研究模型。

首先，MDCK细胞易于培养和传代，能够在多种培养基中良好生长，如DMEM、MEM培养基等，这为实验操作提供了便利，降低了实验成本和难度。其次，其对多种刺激因素敏感，能够在特定诱导条件下高效发生EMT，便于研究人员通过各种实验手段调控EMT进程，观察相关变化。此外，MDCK细胞的特性相对稳定，实验重复性好，有利于不同实验室之间的研究对比和验证。

过往研究中，MDCK细胞在EMT机制探索方面取得了丰硕成果。例如，有研究通过对MDCK细胞施加TGF-β（转化生长因子β）刺激，成功诱导其发生EMT，深入分析了TGF-β信号通路在EMT过程中的激活机制和下游分子事件，揭示了TGF-β通过Smad依赖和非Smad依赖途径调控EMT相关基因表达，影响细胞形态和迁移能力的过程。还有研究利用MDCK细胞研究了Wnt信号通路在EMT中的作用，发现激活Wnt信号可促进MDCK细胞的EMT进程，上调间质细胞标志物表达，下调上皮细胞标志物，同时增强细胞的迁移和侵袭能力。这些研究不仅加深了对EMT分子机制的理解，也为以MDCK细胞为模型进一步探究其他信号通路、基因及分子在EMT中的作用奠定了基础。

1.1.3RON与MARK途径的关联背景

RON（Recepteurd’OrigineNantais）蛋白属于酪氨酸激酶家族，其基因位于人类染色体3p21.31，包含20个外显子，编码具有1403个氨基酸残基的蛋白质。RON是一种跨膜蛋白，细胞外区域包含一个肝细胞生长因子（HGF）结合域和一个光滑肌肌动蛋白结构域；细胞膜上含有一个跨膜域和一个酪氨酸激酶结构域；细胞内区域包含一个配体结合域和一个酶活性结构域。在细胞信号传导中，RON主要通过与配体巨噬细胞刺激蛋白（MSP）结合而被激活，激活后的RON发生自磷酸化，进而招募并激活下游一系列信号分子，启动细胞内信号传导级联反应，在调节细胞增殖、分化、迁移、存活以及组织形态发生等过程中发挥重要作用。例如，在肿瘤细胞中，RON的异常激活可促进细胞的增殖和转移，其通过激活PI3K-AKT、RAS-MAPK等信号通路，调节细胞周期相关蛋白表达，增强细胞的运动和侵袭能力。

MARK途径（丝裂原活化蛋白激酶途径，Mitogen-ActivatedProteinKina