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β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究进展文献综述

β-葡萄糖苷酶可来自植物、动物和微生物。因微生物生长快、酶的来源广且分离简单，因此有关微生物来源的β-葡萄糖苷酶的分离纯化和酶学性质研究受到了关注。王清海（2006）通过硫酸铵盐析、DEAF-52阴离子交换层析和SephadexG-75凝胶层析，纯化得到源自链霉菌的β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为63.89kDa，最佳反应温度为65℃，在70℃以下稳定，最佳反应pH=5，在pH为4-6范围内稳定，Ca2+、Mn2+可激活其活性，而Cu2+、Hg2+、Fe2+则可抑制其活性，以水杨苷为底物测得其Km=10.664mmol/L、Vmax=0.0525μmol·L-1·min-1。郝伟伟（2011）经硫酸铵沉淀、SephadexG-100凝胶层析和DEAE-52阴离子交换层析，纯化得到来源于米曲霉的β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为90kDa，最适反应温度为60℃，在30℃-50℃条件下稳定，最适反应pH=5，pH稳定范围为4-6，Ag+、Zn2+、Co2+、Fe2+、Mn2+对其活性具有激活作用，而Cu2+、K+、Fe3+则具有抑制作用，其对水杨苷和纤维二糖的特异性较强，但不可水解羧甲基纤维素和微晶纤维素。以水杨苷为底物测得其Km=0.676mmol/L、Vmax=0.0206μmol·L-1·min-1，以纤维二糖为底物测得其Km=2.906mmol/L、Vmax=0.138μmol·L-1·min-1。Farahnaz等（2020）通过DEAE-52阴离子交换层析和Resource-S阳离子交换层析纯化得到来自黑曲霉的β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为115kDa，最佳反应温度为50℃，在60℃以下稳定，最佳反应pH=4.5，在pH为3-8条件下稳定，20%的乙醇和甲醇对其活性无显著影响。以水杨苷为底物测得其Km=19.7mmol/L、Vmax=1.199μmol·L-1·min-1。Watanabe等（2016）利用硫酸铵盐析和ToyopearlSuperQ-650M离子交换色谱从米曲霉中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为89.2kDa，最适反应温度为50℃，在60℃以下稳定，最佳反应pH=4.5，在pH为2-8.5范围内稳定，Ca2+、Fe3+、Mg2+和Mn2+可激活其活性，而Hg2+和Zn2+则可抑制其活性，10%的乙醇抑制了其38%的活性，10mmol/L的葡萄糖抑制了其66.9%的活性。其可水解龙胆二糖而对其他低聚糖和芳基类糖苷不发挥水解作用，以龙胆二糖为底物测得其Km=34.9mmol/L。Lucas等（2019）采用SephadexDEAE-A50柱层析、SephacrylS-200HR凝胶层析和TSKDEAE-5PW阴离子交换层析从丝孢菌Chalaraparadoxa中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为167kDa，最佳反应温度为45℃，在50℃以下稳定，最佳反应pH=4-5，pH温度范围为6-9，Ag2+和Hg2+对其活性具有抑制作用，而20%的乙醇将其活性激活了近三倍，其对纤维二糖和对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷具有活性，但不水解乳糖、麦芽糖、蔗糖、纤维素底物或吡喃半乳糖苷，吡喃甘露糖苷或对硝基苯酚木糖苷，以对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷为底物测得其Km=0.52mmol/L，Vmax=294units/mg。

植物源β-葡萄糖苷酶的纯化研究也一直在进行之中，李蕊伽（2017）通过芦荟叶皮的匀浆、硫酸铵盐析、DEAE-Sepharosefastflow层析和Superdex-200prepgrade层析，从芦荟叶皮中获得β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为69.7kDa，最适反应温度为40℃，在50℃以下稳定，最适反应pH=5，pH稳定范围为4-6，K+、Mn2+对其具有激活作用，而Cu2+、Ca2+、Co2+、Cd2+、Ca2+则具有抑制作用，30%及以下的乙醇对其有激活作用。以对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷为底物测得其Km=2.21mmol/L、Vmax=1.381μmol·L-1·min-1。侯梦兰（2018）通过硫酸铵盐析DEAE-52离子交换层析和SephadexG-200凝胶层析从甜菊叶片纯化得到β-葡萄糖苷酶，该酶的大小为55kDa，最佳反应温度为30℃，在30℃-40℃稳定，最佳反应pH=7，在pH为6-8范围内稳定，Fe2+、K+和Mn2+可激活其活性，而Cu2+、Co2+和Hg2+则抑制了该酶活性。Bietal（2019）利用DEAE-SepharoseCL-6B离子交换色谱、SepharoseCL