原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
演讲人：
日期:
检验科液相色谱技术操作手册培训指南
目录
CATALOGUE
01
技术原理基础
02
设备操作准备
03
样品检测规程
04
日常维护要点
05
数据处理规范
06
安全与质控
PART
01
技术原理基础
液相色谱工作原理
高效液相色谱基于样品组分在流动相（液体）与固定相（色谱柱填料）之间的分配系数差异实现分离。极性相近的组分在固定相中保留时间更长，从而实现高效分离。
流动相与固定相相互作用
采用高压输液泵（压力可达40-60MPa）推动流动相通过色谱柱，显著提升传质效率，缩短分析时间并提高分辨率。
高压驱动分离过程
通过程序控制流动相组成比例变化（如乙腈/水梯度），优化不同极性组分的洗脱顺序，适用于复杂样品的分离分析。
梯度洗脱技术
高压输液系统
包括预柱（保护柱）和分离柱（C18等反相柱），柱温箱维持温度精度±0.5℃，柱效需达到100,000理论塔板数/米。
色谱柱子系统
检测器模块
紫外检测器（190-800nm波长范围）、二极管阵列检测器（三维光谱采集）、示差折光检测器（糖类分析专用），灵敏度需达0.001AUFS。
由二元/四元梯度泵、脱气机组成，精确控制流动相流速（0.1-10mL/min）和混合比例，确保基线稳定性（RSD＜1%）。
关键组件功能解析
反相色谱（RPLC）
采用非极性固定相（如C18）和极性流动相（甲醇/水），适用于80%以上有机化合物的分离，保留规律遵循相似相溶原则。
离子交换色谱（IEC）
使用带电官能团固定相（磺酸基/季铵基），通过pH缓冲液调节离子强度，专用于氨基酸、核苷酸等带电物质分离。
尺寸排阻色谱（SEC）
以多孔硅胶为填料，按分子流体力学体积进行分离，主要应用于蛋白质分子量测定（分辨率需达±5%）。
亲和色谱（AC）
通过生物特异性相互作用（如抗原-抗体）实现高选择性分离，纯化效率可达99.9%，用于单克隆抗体纯化等生物制药领域。
分离模式分类
PART
02
设备操作准备
仪器开机前检查
溶剂瓶与废液处理
确认流动相溶剂瓶液位充足且无污染，废液瓶容量足够并妥善放置，避免废液溢出导致设备腐蚀或实验室污染。
系统压力与泄漏测试
启动前需手动检查管路连接处是否紧固，通过低压运行观察压力波动情况，确认无漏液现象。若发现异常需立即停机排查。
电源与线路检查
确保仪器电源线连接稳固，无破损或老化现象，接地良好以避免静电干扰。检查所有附属设备（如检测器、泵、自动进样器）的供电状态是否正常。
流动相配制规范
溶剂纯度与过滤要求
使用色谱级溶剂配制流动相，避免杂质干扰基线稳定性。所有流动相需经0.45μm或更小孔径滤膜过滤，以去除颗粒物并延长色谱柱寿命。
脱气操作流程
配制后需进行超声脱气或在线脱气处理，消除溶解氧和气泡，防止泵送过程中产生压力波动或基线噪声。
比例精度控制
使用高精度移液器或天平配制混合流动相，确保溶剂比例误差小于1%，避免因配比偏差导致保留时间漂移。
色谱柱安装流程
柱温箱适配与固定
将色谱柱两端标识的流动相流向与系统流向一致，垂直安装于柱温箱内并紧固卡扣，避免震动或倾斜导致的峰形展宽。
柱压测试与平衡
以低流速（如0.2mL/min）逐步升高至方法设定流速，监测压力变化是否平稳，并用初始流动相平衡色谱柱至基线稳定（通常需10-15倍柱体积）。
柱前保护柱连接
在分析柱前端加装保护柱，拦截颗粒物和强保留物质，延长分析柱使用寿命。安装时需确保保护柱与分析柱接口无死体积。
PART
03
样品检测规程
样品前处理步骤
根据样品性质选择适当的提取方法（如固相萃取、液液萃取），去除杂质干扰，确保目标分析物纯度满足检测要求。需注意溶剂兼容性及回收率验证。
样品提取与纯化
精确控制稀释倍数，使用符合标准的溶剂（如甲醇、乙腈）定容至目标浓度范围，避免因浓度过高导致色谱柱过载或检测器信号饱和。
样品稀释与定容
通过0.22μm微孔滤膜过滤样品，消除颗粒物堵塞风险；必要时进行超声脱气，减少流动相中气泡对泵系统和基线稳定性的影响。
过滤与脱气处理
自动进样器校准
定期执行进样针精度校验（如体积重复性测试），确保进样量误差小于±1%。需避免交叉污染，每次进样后使用强溶剂清洗针座及样品环。
进样系统操作标准
样品瓶装载规范
使用低吸附材质样品瓶（如聚丙烯），装样量不低于瓶容积的80%以防止挥发；瓶盖密封性需通过压力测试，避免溶剂挥发导致浓度偏差。
进样程序设置
合理设置洗针次数、进样速度及延迟时间，平衡系统压力波动。对于高粘度样品，需延长吸样时间并降低进样速度以保证精度。
运行参数设置方法
流动相梯度优化
根据目标物极性差异设计梯度程序（如乙腈-水比例变化），通过预实验确定最佳洗脱条件，确保峰分离度（R1.5）并缩短分析周期。
色谱柱温度控制
依据固定相耐受范围设定柱温（通常
文档评论（0）