山奈酚重塑结直肠癌细胞糖代谢的作用研究.pdfVIP

中文摘要

结直肠癌（Colorectalcancer，CRC）是全球癌症死亡原因中排名第三的一种癌症，

每年有超过185万确诊病例和85万例死亡。中国国家癌症中心2022年的数据显示，

CRC中男性的发病率和死亡率分别排名第四和第五，女性患者的发病率和死亡率排

名第三和第四。由于经济发展、生活方式和饮食的改变，中国CRC的发病率和死亡

率一直在上升。

肿瘤细胞表现出显著的糖代谢重编程，这使它们能够在营养不良的肿瘤微环境

中存活并迅速增殖。主要表现为：即使在氧气充足的环境下，肿瘤细胞仍倾向于依赖

高度活跃的糖酵解来分解葡萄糖并提供能量。其中间产物的积累能激活磷酸戊糖途

径（Pentosephosphatepathway，PPP）以产生更多的NADPH和核糖-5-磷酸，进而满

足肿瘤快速增长的生物合成需求。此外，还降低了通过线粒体氧化磷酸化（Oxidative

phosphorylation，OXPHOS）产生的活性氧（ROS）数量，这些改变为开发肿瘤细胞

特异性治疗靶点和研发抗癌药物提供了新方向。

近年来，许多天然化合物如类黄酮类、萜类、生物碱和皂苷类等，因其抗肿瘤活

性强、毒性较低、易于利用等优势已被用作肿瘤治疗候选药物。目前，已有文献报道

山奈酚可以抑制结直肠癌的活性，然而具体分子机制尚不清楚。因此，本课题以山奈

酚为研究对象，在体内外评价了其抗结直肠癌活性，并且从重塑糖代谢的角度探讨了

其抗结直肠癌效应的分子机制。主要内容及结果如下：

1.在体内外评价山奈酚的抗结直肠癌活性。

（1）利用Cell-Counting-Kit-8（CCK8）和平板克隆检测了山奈酚对结直肠癌细

胞增殖的影响。实验表明山奈酚呈剂量依赖性抑制结直肠癌DLD1和SW620细胞的

增殖，而对人正常结肠上皮细胞FHC无明显抑制作用。

（2）构建裸鼠皮下成瘤动物模型，研究显示山奈酚干预可明显抑制小鼠肿瘤生

长，但对裸鼠体内主要器官的形态几乎没有影响。

2.转录组学明确山奈酚对结直肠癌细胞糖代谢重塑的作用。

（1）转录组学分析发现，差异基因参与调控的生物过程包括核苷酸代谢、细胞

周期、氧化磷酸化和电子呼吸传递链等。

3.探讨山奈酚通过PFKFB4调控磷酸戊糖途径的分子机制。

（1）Westernblot和免疫荧光观察结果显示，山奈酚处理后DNA损伤标记物γ-

H2AX表达均上调；彗星实验发现山奈酚干预后，彗星的尾矩拉长，表明山奈酚可以

诱导细胞DNA损伤。

（2）核苷酸库不足会导致肿瘤细胞生长受到抑制。我们通过WB、EdU实验证

明了补充外源核苷可逆转山奈酚诱导的DNA损伤和DNA合成抑制。之后通过流式

检测对细胞凋亡的影响，发现山奈酚处理细胞后会增加细胞凋亡的数量，而补充外源

核苷酸可减少细胞的凋亡。

（3）磷酸戊糖途径氧化阶段的第一个限速酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-

phosphatedehydrogenase，G6PD）的抑制剂6-氨基烟酰胺（6-Aminonicotinamide）处

理细胞后，通过使用westernblot检测γ-H2AX的表达，结果显示其表达无明显变化，

说明山奈酚诱导的DNA损伤并非由磷酸戊糖途径的氧化阶段引起。通过qPCR和

WB检测磷酸戊糖途径非氧化阶段中TKT的表达，发现山奈酚会抑制TKT的表达，

表明山奈酚诱导的DNA损伤与磷酸戊糖途径的非氧化阶段有关。将PFKFB4过表达

后发现TKT的表达升高，通过免疫共沉淀实验发现PFKFB4可以和TKT相互作用，

这些结果表明PFKFB4可以通过TKT调节PPP。

4.探讨山奈酚通过TFAM调控线粒体氧化磷酸化的机制。

（1）Westernblot检测TCA循环蛋白柠檬酸合酶（CS）、异柠檬酸脱氢酶1

（IDH1）和氧化磷酸化复合物I-COQ9、III-UQCRC1、III-UQCRC2、IV-COX4的蛋

白表达，发现山奈酚可以促进结直肠癌细胞中线粒体OXPHOS的上调。

（2）山奈酚干预能够促进TFAM上游一系列转录因子PGC-1α、NRF-1和NRF-

2的表达，表明山奈酚通过PGC-1α/NRF-1/2/TFAM轴恢复线粒体OXPHOS能力。

（3）采用western