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MicroRNAs：调控血管内皮细胞衰老与血管功能的关键密码

一、引言

1.1研究背景与意义

随着社会经济的飞速发展，国民生活方式发生了深刻变革，尤其是人口老龄化及城镇化进程的加速，中国心血管病危险因素流行趋势呈明显上升态势，心血管病的发病人数持续增加。《中国心血管病报告2018》显示，我国心血管病患病率仍处于上升阶段，目前患病人数约为2.9亿，心血管病导致的死亡占居民疾病死亡的40%以上，居各类疾病首位，已然成为重大的公共卫生问题。

血管内皮细胞作为血管内壁的一层薄细胞，在维持血管稳态、调节血压、抗血栓形成和促进血管新生等方面发挥着至关重要的作用。衰老是心血管疾病的主要危险因素，随着年龄的增长，血管内皮细胞会逐渐衰老，其形态和功能也会发生一系列变化。衰老的血管内皮细胞表现为血管舒张反应受损、促炎和促血栓形成因子表达增加，这些变化与心血管疾病（CVD）发病率和死亡率增加密切相关。在衰老状态的血管内皮细胞中，调控内皮依赖的血管收缩和舒张功能的炎性因子、凝血因子、抗氧化因子等表达水平发生变化，影响血管功能，促进血栓形成。如培养衰老的人脐静脉内皮细胞，会发现一氧化氮（NO）和内皮NO合成酶（eNOS）活性降低，血流剪切力增加时，NO增加程度在衰老的内皮细胞中也降低；活性氧自由基的产生在衰老细胞中显著升高，导致NO生物利用度降低、过氧硝酸盐生成增加；衰老的血管内皮细胞中前列腺素水平降低，血栓素A2和内皮素-1的表达水平增加，纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）被上调。因此，内皮细胞衰老参与血管功能紊乱及动脉粥样硬化、血栓形成、高血压等多种心脑血管疾病的病理过程。

微小RNA（MicroRNAs，miRNAs）是一类高度保守的单链非编码RNA，长度大约为20～26个核苷酸，在真核细胞中调节基因的表达。目前研究表明，人类有2042种miRNAs（/），这些miRNAs在物种间保守，广泛表达，参与调节多种生物学过程，包括发育、分化、生长和代谢等。近年来的实验证据表明miRNAs能够调节血管内皮细胞的生理功能，体外敲除人内皮细胞中miRNAs合成酶可减少血管新生。越来越多的研究发现miRNA与心血管疾病的发生、发展密切相关，miRNA通过对内皮细胞结构及功能、黏附分子、细胞迁移增殖及细胞凋亡等不同形式的调控，参与动脉粥样硬化的发病过程。与内皮细胞功能相关的miRNAs有可能作为治疗与内皮细胞衰老相关疾病的新靶点。深入研究MicroRNAs对血管内皮细胞衰老及血管功能的影响，有助于揭示心血管疾病的发病机制，为心血管疾病的预防和治疗提供新的靶点和策略，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2研究目的与创新点

本研究旨在深入探究MicroRNAs对血管内皮细胞衰老及血管功能的影响机制，具体目的如下：首先，筛选出与血管内皮细胞衰老及血管功能密切相关的MicroRNAs，并明确其在血管内皮细胞中的表达变化规律；其次，通过体外实验和体内实验，研究这些MicroRNAs对血管内皮细胞衰老相关指标（如细胞周期、衰老相关蛋白表达等）以及血管功能（如血管舒张、收缩功能等）的影响；最后，进一步探讨MicroRNAs调控血管内皮细胞衰老及血管功能的分子信号通路，为心血管疾病的防治提供新的理论依据和潜在治疗靶点。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：一是采用多维度研究方法，综合运用细胞生物学、分子生物学、生物信息学等技术手段，从基因、蛋白、细胞和动物模型等多个层面深入研究MicroRNAs对血管内皮细胞衰老及血管功能的影响，使研究结果更加全面和深入；二是有望发现新的与血管内皮细胞衰老及血管功能相关的MicroRNAs靶点，为心血管疾病的诊断和治疗提供新的生物标志物和治疗靶点；三是深入解析MicroRNAs调控血管内皮细胞衰老及血管功能的分子机制，有助于揭示心血管疾病的发病机制，为开发新型治疗策略提供理论基础。

1.3研究方法与技术路线

本研究拟采用以下研究方法：一是实验研究，包括细胞实验和动物实验。细胞实验方面，原代培养人脐静脉内皮细胞，通过传代培养或其他方法建立血管内皮细胞衰老模型，然后转染相关的MicroRNAs模拟物或抑制剂，运用MTT法、流式细胞术、Westernblot等技术检测细胞增殖、凋亡、周期以及衰老相关蛋白的表达变化；采用小管形成实验、细胞迁移实验等检测血管内皮细胞的血管新生和迁移能力。动物实验方面，构建合适的动物模型，如动脉粥样硬化小鼠模型，通过尾静脉注射等方式给予MicroRNAs类似物或拮抗剂，利用超声检测、血管张力测定等方法评估血管功能的变化。二是临床观察，收集心血管疾病患者和健康对照者的血液或血管组织样本，