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解析水稻籽粒γ-氨基丁酸含量QTL位点qGABA8：精细定位与基因候选探索

一、引言

1.1研究背景与意义

γ-氨基丁酸（γ-AminobutyricAcid，GABA）作为一种以游离态广泛存在于生物体内的非蛋白质氨基酸，在人体生理功能调节中扮演着关键角色。在动物体内，虽然自身能够合成少量的γ-氨基丁酸，但大部分仍依赖从食物中摄取。γ-氨基丁酸在人体中是重要的神经抑制性递质或递质前体，深度参与神经活动。研究表明，它具有诸多对人体健康至关重要的生理功能，如有效降低血压，通过作用于血管中枢，使血管扩张，减少外周阻力，从而实现血压的降低；降低血脂，抑制胆固醇和甘油三酯的合成，促进脂肪代谢，进而降低血液中脂质含量，对预防和改善动脉粥样硬化具有积极意义；促进脑血液流量和增加脑供氧量，调节脑血管的舒缩状态，保证大脑充足的血液和氧气供应，有助于提高大脑的工作效率，增强记忆力和注意力；促进细胞代谢，加速细胞内的物质转化和能量利用，维持细胞的正常生理功能，对中风后遗症患者的康复也有一定的辅助作用，能够改善患者的运动功能和认知能力。此外，γ-氨基丁酸还具有改善肝肾功能、促进酒精降解、缓解疲劳感和防止肥胖等作用。

稻米作为全球最重要的粮食作物之一，是世界上超过半数人口的主食，在人类饮食结构中占据着举足轻重的地位。我国作为水稻种植大国，全国有60%以上的人口以大米为主食，食用量约占稻谷总量的85%。然而，在天然稻米中，γ-氨基丁酸的含量通常较低，常规稻米中γ-氨基丁酸的含量一般在1-5mg/100g之间，远远不能达到人体通过饮食补充γ-氨基丁酸以发挥其保健作用的理想水平。随着人们健康意识的不断提高以及对功能性食品需求的日益增长，如何提高稻米中γ-氨基丁酸的含量，已成为农业和食品领域的研究热点之一。

在水稻遗传育种研究中，数量性状基因座（QuantitativeTraitLocus，QTL）定位是挖掘优良基因、解析复杂性状遗传机制的重要手段。qGABA8位点作为与水稻籽粒γ-氨基丁酸含量相关的QTL位点，对其进行深入研究具有重要价值。通过精细定位qGABA8位点，可以更准确地确定其在染色体上的位置，明确与之紧密连锁的分子标记，为分子标记辅助选择（MAS）育种提供精准的工具。在传统的水稻育种过程中，选择优良品种往往依赖于表型鉴定，这不仅耗费大量的时间和人力，而且准确性容易受到环境因素的影响。而基于qGABA8位点的分子标记辅助选择育种，能够在早期世代对目标性状进行准确选择，大大缩短育种周期，提高育种效率，加速富含γ-氨基丁酸水稻新品种的培育进程。对qGABA8位点进行基因候选分析，有助于揭示控制γ-氨基丁酸含量的分子遗传机制，为通过基因工程手段提高水稻籽粒γ-氨基丁酸含量提供理论基础和基因资源。

1.2研究目的与内容

本研究旨在对水稻籽粒γ-氨基丁酸含量QTL位点qGABA8进行精细定位，并筛选和验证与之相关的候选基因。具体研究内容包括：

选用合适的水稻材料，构建用于qGABA8位点精细定位的群体，这些材料需在γ-氨基丁酸含量上具有明显差异，以确保定位结果的准确性和可靠性。

利用分子标记技术，对构建的群体进行基因型分析，结合表型数据，逐步缩小qGABA8位点所在的区间，实现该位点的精细定位。在此过程中，需要开发和筛选多态性高、稳定性好的分子标记，以提高定位的精度。

在精细定位的基础上，通过生物信息学分析、基因表达分析等方法，筛选出可能与γ-氨基丁酸含量相关的候选基因。并进一步通过转基因验证、基因功能互补实验等手段，对候选基因的功能进行验证，明确其在调控水稻籽粒γ-氨基丁酸含量中的作用。

1.3研究方法与技术路线

本研究选用具有γ-氨基丁酸含量差异显著的水稻品种作为亲本，如高含量的高粱稻-1和低含量的宁农黑粳，通过杂交、回交等方式构建F2、F3等分离群体。利用简单重复序列（SSR）标记、插入缺失（InDel）标记等对群体单株进行基因型分析。其中，SSR标记具有多态性高、共显性、操作简单等优点，已广泛应用于水稻遗传图谱构建和QTL定位研究；InDel标记则基于基因组中插入或缺失的DNA片段开发，具有特异性强、稳定性好的特点。同时，采用高效液相色谱法（HPLC）测定水稻籽粒中的γ-氨基丁酸含量，该方法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高等优点，能够准确测定水稻籽粒中低含量的γ-氨基丁酸。

技术路线如图1-1所示，首先种植亲本及分离群体，待植株生长至合适阶段，提取叶片DNA，利用SSR和InDel标记进行基因型检测。收获成熟种子后，测定籽粒γ-氨基丁酸含量，获得表型数据。将基因型和表型数据进