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病理科病理解剖切片技术教程

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目录

01

基础概念与原理

02

组织固定技术

03

包埋与硬化过程

04

切片操作规范

05

染色与封片技术

06

质量控制与维护

01

基础概念与原理

显微观察基础

在临床病理诊断中用于明确疾病性质（如肿瘤良恶性鉴别），在科研领域则服务于组织形态学、免疫组化及分子病理学研究，是连接宏观与微观世界的桥梁技术。

诊断与研究双重功能

质量控制要求

标准化切片需满足厚度均匀、无皱褶、无刀痕等技术指标，需通过脱水、包埋、切片、展片等15道以上工序的精确控制实现，直接影响后续诊断准确性。

切片技术是通过将生物组织切成极薄（通常2-10微米）的薄片，经染色处理后置于显微镜下观察，以研究组织结构和病理变化的标准化方法。其核心目的是保留组织原始形态特征并增强显微可视性。

切片技术定义与目的

组织学基本原理

不同组织类型的细胞外基质成分（如胶原纤维、弹性纤维）密度差异决定了切片难度，致密组织（如骨组织）需先进行脱钙处理，而柔软组织（如脑组织）需加强固定防止切片碎裂。

细胞外基质特性

组织固定环节（常用10%中性福尔马林）通过交联蛋白质保持细胞三维结构，固定不足会导致细胞器移位，过度固定则引起组织脆化，需严格控制在24-48小时范围内。

细胞极性保持

苏木精-伊红（HE）染色中，苏木精带正电荷与DNA磷酸基团结合显蓝色，伊红带负电荷与胞质蛋白结合显红色，这种电荷互补原理实现细胞核与胞质的差异化显色。

染色对比原理

肿瘤分级金标准

在WHO肿瘤分类体系中，组织学切片是判定肿瘤分化程度、浸润深度及分期的基础，如乳腺癌Nottingham分级系统完全依赖切片观察的腺管形成、核多形性等指标。

技术应用价值

特殊染色拓展应用

除常规HE染色外，Masson三色染色可显示纤维化程度，PAS染色识别基底膜完整性，刚果红染色检测淀粉样变性，每种特殊染色需对应特定的组织前处理方案。

数字化病理基础

高质量切片是构建全玻片数字化（WSI）系统的前提，需达到每像素0.25微米的分辨率标准，这对切片平整度、厚度一致性提出了比传统镜检更高的技术要求。

02

组织固定技术

渗透性与扩散速率

固定液需具备良好的组织渗透性，确保快速均匀渗透至组织深层，避免中心区域固定不足。常用中性缓冲福尔马林因其分子量小、扩散速率快成为首选。

形态保存能力

优质固定液需最大限度保留细胞形态和亚显微结构，如戊二醛能完美固定细胞膜和细胞器，但可能影响后续免疫组化检测。

安全性与环保性

优先选择低挥发、低毒性的固定剂，减少对操作人员的危害。乙醇-甲醛混合液在保持固定效果的同时可降低甲醛浓度。

化学稳定性与兼容性

固定液应保持化学性质稳定，不与组织成分发生有害反应。避免使用含重金属或强酸性的固定剂，防止组织过度硬化或染色异常。

固定液选择标准

固定步骤与方法

标本预处理规范

组织离体后需立即投入足量固定液（体积比为10:1），大标本应剖开或切片以保证固定液充分接触。神经组织等特殊样本需先灌注固定再浸泡。

01

分层固定技术

对于厚度超过5mm的组织，建议采用梯度固定法，先低浓度固定液初步稳定结构，再转入标准浓度液完成深度固定。

真空辅助固定

对致密组织（如子宫肌瘤）采用负压渗透技术，通过抽真空排除组织间隙气体，加速固定液渗透，缩短总固定时长。

动态固定系统

研发中的微流控固定装置可实现固定液循环灌注，特别适用于科研中需要超微结构保存的珍贵样本。

02

03

04

固定时间与温度控制

标准温控参数

常规病理标本应在20-25℃环境下固定，温度波动需控制在±2℃以内。低温环境会显著减缓甲醛交联反应速度。

时间计算公式

固定时长与组织厚度平方成正比，采用t=k×d²公式计算（k为组织类型系数，如肝组织k=1.2，脑组织k=1.8）。

快速固定方案

急诊标本可采用微波辅助固定，在60℃条件下使固定时间缩短至常规的1/5，但需严格控制微波功率防止组织过热变形。

延迟固定补偿

对无法立即固定的手术标本，建议先用生理盐水湿润纱布包裹，4℃冷藏保存，最长延迟时间不宜超过样本自溶临界期。

03

包埋与硬化过程

包埋材料类型

石蜡是最常用的包埋介质，具有熔点稳定、渗透性好、切片易成型的特点，适用于大多数组织样本的包埋处理。

石蜡包埋

环氧树脂或丙烯酸树脂适用于超薄切片技术，尤其适合电镜观察的样本，能提供更高的硬度和分辨率。

采用OCT化合物或羧甲基纤维素等冷冻介质，适用于需要快速冷冻保存组织结构的样本，避免常规包埋导致的抗原损失。

树脂包埋

明胶包埋适用于柔软或易碎组织，如脑组织或胚胎样本，可减少切片过程中的组织损伤。

明胶包埋

01

02

04

03

冷冻包埋

包埋操作流程

将包埋盒置于冷台或冰板上快速冷却，使石蜡凝固成型，便于后续切片机夹持。

冷却固