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检验科预防莱姆病的实验室检验流程

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目录

CATALOGUE

02

检测方法与技术

03

质量控制措施

04

结果分析与报告

05

预防策略实施

06

记录与维护

01

样本接收与准备

01

样本接收与准备

PART

样本类型识别

如皮肤病灶组织，需固定于特定保存液中，并标注采样部位及临床信息以辅助诊断。

组织活检样本

针对神经系统莱姆病病例，需无菌采集并立即送检，避免长时间存放导致病原体活性下降。

脑脊液样本

适用于PCR检测病原体核酸，需使用EDTA抗凝管采集，避免反复冻融以保证DNA完整性。

全血样本

主要用于检测莱姆病特异性抗体，需确保样本无溶血、脂血或污染，采集后需及时分离血清并低温保存。

血清样本

接收登记流程

电子系统录入

通过LIS系统登记样本信息，生成唯一条码标签并粘贴于样本容器，避免混淆或丢失。

冷链交接记录

低温运输样本需验证运输温度并记录交接人员，确保样本稳定性符合检测要求。

样本信息核对

接收时需严格核对患者ID、样本类型、采集时间及临床申请项目，确保信息完整无误。

异常样本处理

对不符合接收标准的样本（如泄漏、量不足）需记录并联系临床重新采集，留存书面说明备查。

初步处理标准

离心分离规范

血清样本需在采集后规定时间内离心，转速与时长需符合标准以避免细胞残留影响检测。

分装与保存

将处理后的样本分装至冻存管，标注清晰并存入-80℃超低温冰箱或液氮罐，防止反复冻融。

生物安全防护

操作时需在生物安全柜中进行，穿戴防护装备，废弃样本容器需高压灭菌后按医疗废物处理。

质量控制步骤

每批次处理需加入空白对照与已知阳性对照，监控样本处理环节的污染风险及操作误差。

02

检测方法与技术

PART

血清学检测步骤

采集患者静脉血3-5ml，室温静置30分钟后离心分离血清，避免溶血和脂血干扰。血清样本需在2-8℃保存（72小时内检测）或-20℃长期冻存。

样本采集与处理

使用莱姆病特异性IgM/IgG抗体检测试剂盒，将血清稀释后加入包被伯氏疏螺旋体抗原的反应板，37℃孵育45分钟。洗板后加入酶标二抗，通过显色反应判断抗体效价，OD值大于临界值1.2倍判为阳性。

ELISA初筛检测

对ELISA阳性样本进行免疫印迹分析，使用重组OspC、VlsE等特异性抗原膜条带，观察IgM（出现至少2条特异性条带）或IgG（至少5条条带）的抗原抗体反应模式以确认结果。

WesternBlot确证试验

采用磁珠法或酚-氯仿法从患者全血、脑脊液或皮肤活检组织中提取DNA，使用核酸浓度测定仪确保DNA浓度≥10ng/μl，A260/A280比值在1.7-2.0之间。

核酸提取

通过2%琼脂糖凝胶电泳检测230bp目标条带，阳性样本需进行测序比对（与GenBank中B.burgdorferi序列相似度≥98%）。实时荧光PCR可检测低至10拷贝/μl的病原体DNA。

产物分析与判读

PCR分子诊断流程

暗视野显微镜检查

将标本涂片甲醇固定后，用10%吉姆萨染液染色30分钟。阳性标本可见染成紫红色的螺旋体，每油镜视野（1000倍）发现≥2条形态典型病原体具有诊断价值。注意与口腔螺旋体等共生菌区分。

吉姆萨染色镜检

银染增强检测

采用Warthin-Starry银染法，螺旋体被染成黑褐色，背景呈黄色。该方法灵敏度可达10^3菌体/ml，但需严格质量控制避免假阳性（染色时间控制在15-20分钟，温度60℃）。

采集疑似游走性红斑边缘组织液或血液标本，立即置于暗视野显微镜（400倍）下观察。伯氏疏螺旋体呈螺旋状（长10-30μm，直径0.2-0.5μm），具有典型旋转运动特征，需与纤维蛋白丝等杂质鉴别。

显微镜检验要点

03

质量控制措施

PART

内部质控执行

实验室需每日使用已知浓度的质控样本进行检测，确保试剂和仪器的稳定性，记录质控数据并分析趋势，及时发现潜在偏差。

每日质控样本检测

定期修订和审核实验室SOP文件，确保所有操作步骤符合最新技术规范，减少人为操作误差。

标准操作流程（SOP）审核

对检验人员进行周期性理论和实操培训，通过盲样测试或模拟操作评估其技术熟练度，保证检测结果一致性。

人员培训与考核

外部质控参与

实验室间比对计划

定期参加权威机构组织的实验室间能力验证（PT），通过与其他实验室的结果对比，评估本实验室检测系统的准确性。

第三方质控品引入

接入区域性质量控制网络，实时上传质控数据并获取同行反馈，持续优化检测流程。

采用国际认证的第三方质控品进行盲测，验证检测方法的敏感性和特异性，确保结果与国际标准接轨。

质控数据共享平台

对所有检测设备（如酶标仪、PCR仪）进行周期性校准和性能验证，确保其灵敏度、精密度和线性范围符合检测要求。

设备校准规范

定期性能验证

建立完整的设备校准档案，包括校准日期、参数调