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K88ac+大肠杆菌减毒株的构建及小鼠体内应用：开启肠道疾病防治新篇

一、引言

1.1研究背景与意义

大肠杆菌（Escherichiacoli）作为一种广泛存在于环境中的肠道菌，可分为致病性和非致病性两类。致病性大肠杆菌是人和动物体内常见的病原菌之一，能够引发诸多肠道感染和疾病，如腹泻、肠胃炎等，严重威胁着宿主的健康。在众多致病性大肠杆菌中，K88ac+大肠杆菌是产肠毒素性大肠杆菌（EnterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC）的一种重要类型，其在仔猪养殖中尤为突出，是导致仔猪腹泻的主要病原菌之一。

仔猪腹泻是仔猪养殖过程中常见且危害严重的疾病。据相关研究表明，国内约有35%的仔猪腹泻是由ETEC引起的，而在美国等国家，新生仔猪腹泻中由ETEC引起的占比更是高达45%以上。K88ac+大肠杆菌凭借其特殊的黏附素和产生的肠毒素，能够黏附在仔猪肠道上皮细胞上并大量繁殖，进而产生毒素，破坏肠道正常生理功能，引发仔猪腹泻。患病仔猪常出现精神萎靡、食欲不振、脱水等症状，严重时甚至会导致死亡。这不仅降低了仔猪的成活率和生长性能，增加了养殖成本，还因频繁使用抗生素治疗，引发了细菌耐药性和药物残留等问题，对养猪业的可持续发展造成了巨大挑战，也给食品安全带来了潜在风险。

构建K88ac+大肠杆菌减毒株对于解决上述问题具有至关重要的意义。减毒株在保留一定免疫原性的同时，致病性显著降低，有望作为新型疫苗的候选菌株。通过接种减毒疫苗，能够刺激动物机体产生有效的免疫应答，提高动物对K88ac+大肠杆菌感染的抵抗力，从而预防和控制仔猪腹泻的发生。这不仅有助于保障动物健康，提高养殖效益，还能减少抗生素的使用，降低药物残留，保障食品安全，促进养殖产业的绿色可持续发展。因此，开展K88ac+大肠杆菌减毒株的构建及其相关研究具有重要的理论和实际应用价值。

1.2K88ac+大肠杆菌概述

K88ac+大肠杆菌属于产肠毒素性大肠杆菌，具有独特的生物学特性。从形态学上看，其为革兰氏阴性直杆菌，大小约为5-0.8μm×1.0-3.0μm，无芽孢，多数菌株具有动力，拥有普通菌毛与性菌毛，部分菌株还带有多糖类荚膜。在生长特性方面，其最佳生长温度为37℃，最佳pH值为7.2-7.4，在普通琼脂培养基上能够良好生长，可形成圆形、边缘整齐、稍隆起、光滑且半透明的灰白色菌落，在鉴别性或选择性培养基上则形成有颜色、直径2-3mm的光滑型菌落。

其致病机制较为复杂，主要依赖于毒力因子发挥作用。黏附素是其重要的毒力因子之一，K88ac即为其中一种常见的黏附素。K88黏附素主要由相对分子质量为23500-27500的主要亚单位（FaeG）蛋白聚合而成，根据免疫学特征可分为K88ab、K88ac和K88ad三种血清学变体，其中K88ac是常见的变异体形式。黏附素能够与仔猪肠道上皮细胞表面的特定受体结合，如K88的受体为D-半乳糖，主要表达在小肠，通过这种特异性结合，大肠杆菌得以在肠道内定植，避免被动物消化道蠕动排出，为后续致病过程奠定基础。

肠毒素也是关键毒力因子，可分为耐热肠毒素（heat-stableenterotoxin，ST）和热敏肠毒素（heat-labileenterotoxin，LT）。这些肠毒素在大肠杆菌生长和增殖过程中产生，进入肠道后，先与肠壁上皮细胞受体GM1结合。耐热肠毒素与GM1受体结合后刺激肠上皮细胞中腺苷酸环化酶（AC）的分泌，促使细胞质中环磷酸腺苷（cAMP）含量持续增高；不耐热肠毒素与GM1受体结合后，刺激肠上皮细胞中鸟苷酸环化酶（GC）的分泌，使细胞浆中环磷酸鸟苷酸（cGMP）的分泌上升。环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷酸的变化导致肠腺细胞分泌水平升高，小肠内积聚大量肠液，超过肠道吸收能力，最终引发腹泻，导致机体出现高血钾、脱水、代谢性酸中毒等症状，严重时可致心力衰竭甚至死亡。

在致病性大肠杆菌的研究领域中，K88ac+大肠杆菌一直是研究的重点和热点。国内外众多学者围绕其流行病学、致病机制、耐药性以及防控措施等方面展开了深入研究。在流行病学方面，对其在不同地区、不同养殖环境下的感染率和流行特点进行了广泛调查；在致病机制研究上，不断探索毒力因子的作用方式和调控机制；针对耐药性问题，监测其对各类抗生素的耐药情况，为临床合理用药提供依据；在防控措施研究中，尝试开发新型疫苗和治疗方法，以有效控制其危害。然而，尽管取得了一定的研究成果，但目前仍存在许多亟待解决的问题，如现有疫苗的免疫保护效果有限，耐药菌株的不断出现使得治疗难度加大等，这也为进一步深入研究K88ac+大肠杆菌提供了动力和方向。