甘薯U6启动子克隆及其转录活性分析.pdfVIP

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２４ꎬ４０(６):９６９￣９７４

ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ９６９

唐维ꎬ后猛ꎬ宋炜涵ꎬ等.甘薯Ｕ６启动子克隆及其转录活性分析[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２４ꎬ４０(６):９６９￣９７４.

ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２４.０６.００２

甘薯Ｕ６启动子克隆及其转录活性分析

唐维ꎬ后猛ꎬ宋炜涵ꎬ闫会ꎬ王欣ꎬ李臣ꎬ高闰飞ꎬ张允刚ꎬ李强

(江苏徐淮地区徐州农业科学研究所/农业农村部甘薯生物学与遗传育种重点实验室ꎬ江苏徐州２２１１３１)

摘要:在ＣＲＩＳＰＲ/Ｃａｓ９基因编辑系统中ꎬＵ６启动子可以通过驱动ｓｇＲＮＡ的表达来编辑目的基因ꎬ因而其转

录活性会影响基因编辑效率ꎮ尽管人们已经在拟南芥、玉米、大豆、棉花等植物中开展了Ｕ６启动子的克隆与应用

研究ꎬ然而目前在甘薯中Ｕ６启动子的相关研究还未见报道ꎮ本研究利用拟南芥的ＡｔＵ６ＳｎＲＮＡ的保守序列在三

浅裂野牵牛(Ｉｐｏｍｏｅａｔｒｉｆｉｄａ)基因组数据库中搜索候选Ｕ６ＲＮＡꎬ然后在其上游搜索到２个不同的候选Ｕ６启动子ꎬ

长度分别为５２６ｂｐ(ＩｂＵ６ｐ￣１)和５３２ｂｐ(ＩｂＵ６ｐ￣２)ꎻ序列比对分析结果显示ꎬ甘薯的Ｕ６启动子具有上游序列元件

(ＵＳＥ)以及ＴＡＴＡ￣ｂｏｘꎬ其序列也与拟南芥高度相似ꎮ然后ꎬ利用获得的Ｕ６启动子核酸序列构建了能够驱动萤火虫

荧光素酶基因(ＬＵＣ)表达的重组框Ｕ６::ＬＵＣꎮ最后ꎬ将含有上述重组载体的根癌农杆菌瞬时转化到本氏烟草叶片

和甘薯愈伤组织中ꎬ并通过荧光成像技术分析荧光素酶活性ꎮ结果发现ꎬ在烟草及甘薯愈伤组织中２个甘薯Ｕ６启

动子均能驱动ＬＵＣ基因表达ꎬ具有转录活性ꎮ同时ꎬＩｂＵ６ｐ￣２的转录活性无论是在烟草叶片中还是在甘薯愈伤组织

中都显著高于拟南芥Ｕ６启动子ꎮ本研究结果为进一步发展甘薯基因编辑技术提供了参考ꎮ

关键词:甘薯ꎻＵ６启动子ꎻ克隆ꎻ基因编辑ꎻ转录活性

中图分类号:Ｓ５３１文献标识码:Ａ文章编号:１０００￣４４４０(２０２４)０６￣０９６９￣０６

ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆＵ６ｐｒｏｍｏｔｅｒｉｎｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ

ＴＡＮＧＷｅｉꎬＫＯＵＭｅｎｇꎬＳＯＮＧＷｅｉｈａｎꎬＹＡＮＨｕｉꎬＷＡＮＧＸｉｎꎬＬＩＣｈｅｎꎬＧＡＯＲｕｎｆｅｉꎬ

ＺＨＡＮＧＹｕｎｇａｎｇꎬＬＩＱｉａｎｇ

(ＸｕｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｉｎＪｉａｎｇｓｕＸｕｈｕａｉＤｉｓｔｒｉｃｔ/ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｗｅｅｔＰｏｔａｔｏＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＢｒｅｅｄｉｎｇꎬＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ

ａｎｄＲｕｒａｌＡｆｆａｉｒｓꎬＸｕｚｈｏｕ２２１１３１ꎬＣｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＩｎｔｈｅＣＲＩＳＰＲ/Ｃａｓ９ｇｅｎｅｅｄｉｔｉｎｇｓｙｓｔｅｍꎬｔｈｅＵ６ｐｒｏｍｏｔｅｒｃａｎｅｄｉｔｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｂｙｄｒｉｖｉｎｇｓｇＲＮＡｅｘｐｒｅｓ￣

ｓｉｏｎꎬｓｏｉｔｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙｃａｎａｆｆｅｃｔｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｇｅｎｅｅｄｉｔｉｎｇ.ＡｌｔｈｏｕｇｈｓｔｕｄｉｅｓｏｎｃｌｏｎｉｎｇａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＵ６

ｐｒｏｍｏｔｅｒｈａｖｅｂｅｅｎｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａꎬｃｏｒｎꎬｓｏｙｂｅａｎꎬｃｏｔｔｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｐｌａｎｔｓꎬｔｈｅｒｅａｒｅｎ’ｔａｎｙｒｅｐｏｒｔｓｏｎ

ｒｅｌａｔｉｖｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆＵ６ｐｒｏｍｏｔｅｒｉｎｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｗｅｓｅａｒｃｈｅｄｔｈｅＩｐｏｍｏｅａｔｒｉｆｉｄａｇｅｎｏｍｅｄａｔａｂａｓｅｆｏｒｃａｎｄｉｄａｔｅ