有氧运动激活DDAH1促进CTX诱导的小鼠骨骼肌损伤后再生的机制研究.pdfVIP

摘要

研究背景：

骨骼肌损伤是常见的运动损伤之一，深入研究其损伤后再生的机制对运动员

早日重返赛场具有重要的意义。骨骼肌损伤后再生过程与卫星细胞（SC）的激活、

增殖、分化和融合的有关，其中一氧化氮（NO）及相关信号通路可通过改变SC

的粘附性介导其激活，影响骨骼肌再生的过程。二甲基精氨酸二甲氨基水解酶1

（DDAH1）可通过降解内源性一氧化氮合酶（NOS）的抑制剂不对称二甲基精氨

酸（ADMA）调节NOS活性，从而影响NO的生成。有氧运动可上调骨骼DDAH1

的表达，但目前尚无研究深入探讨DDAH1对骨骼肌损伤后再生的作用，有氧运

动是否通过上调DDAH1影响骨骼肌再生的机制也未被阐明。

研究目的：

研究有氧运动对眼镜蛇毒素（CTX）诱导的骨骼肌损伤后再生的影响与机制，

探讨DDAH1在CTX诱导的骨骼肌损伤后再生中的作用和机制，并进一步明确

骨骼肌DDAH1是否介导有氧运动对骨骼肌再生的促进作用。

研究方法：

研究一：主要探究有氧运动对骨骼肌DDAH1表达的影响以及有氧运动对

CTX诱导的骨骼肌损伤后再生的作用和机制。本研究使用C57BL/6J小鼠，有氧

运动干预方案采用8周游泳训练方案，每天进行60分钟，每周干预5天。在有

氧运动干预结束后24h，使用CTX诱导小鼠骨骼肌损伤后再生模型，在相应时

间点取材做后续检测处理。

研究二：主要探究DDAH1对骨骼肌损伤后骨骼肌再生的影响以及作用机制。

本研究先使用C2C12成肌细胞，使用含马血清的培养基诱导C2C12细胞分化的

模型，并通过慢病毒感染的方式在C2C12成肌细胞中稳定敲低Ddah1，来探究

DDAH1对C2C12成肌细胞分化和融合的作用。为了进一步探究DDAH1对骨骼

肌再生的具体作用，本研究培育了骨骼肌特异性敲除Ddah1的Ddah1MKO小鼠和

其对照Ddah1f/f小鼠，鉴定成功后，待小鼠6-8周龄时使用CTX诱导骨骼肌损伤

后再生的模型，在相应时间点取材做后续检测处理。

研究三：主要阐明DDAH1是否介导有氧运动对骨骼肌再生的保护作用及其

机制。本研究使用6-8周龄Ddah1MKO小鼠，先采用有氧运动对Ddah1MKO小鼠

进行干预，后使用CTX诱导骨骼肌损伤后再生的模型，在相应时间点取材做后

续检测处理。

研究结果：

研究一：1、与SED组相比，EXE组小鼠骨骼肌DDAH1蛋白表达上调（P

＜0.01），血清ADMA水平下降（P＜0.01）。

2、与Control组小鼠相比，使用CTX诱导骨骼肌损伤后，SED组小鼠在

CTX-D3时血清LDH、ADMA和NOx水平显著升高（P＜0.05），骨骼肌组织出

现明显的炎症反应、巨噬细胞浸润、氧化应激和细胞凋亡（P＜0.05）；SED组小

鼠在CTX-D5时出现骨骼肌再生，SC数量显著增加（P＜0.01），分化标志蛋白

myogenin和MyH4表达显著上调（P＜0.01）；在CTX-D14时骨骼肌出现显著纤

维化（P＜0.01）。

3、与SED组小鼠相比，使用CTX诱导骨骼肌损伤后，EXE组小鼠骨骼肌

再生被促进，骨骼肌损伤被减弱。具体表现为：与SED组小鼠相比，EXE组小

鼠在CTX-D5时骨骼肌再生被促进，SC数量显著增加（P＜0.01），SC分化标志

蛋白myogenin和MEF表达显著上调（P＜0.05）；在CTX-D14时骨骼肌纤维化

水平显著降低（P＜0.01）；在CTX-D3时血清ADMA显著下降（P＜0.05），NOx

水平显著升高（P＜0.01），骨骼肌组织炎症反应、巨噬细胞浸润、氧化应激和细

胞凋亡显著减弱（P＜0.05）。

研究二：1、与增殖期C2C12细胞相比，分化期C2C12细胞表达MyH4蛋

白（P＜0.01），细胞形态由梭形单核状转变为长条串珠状多核状。

2、与shScr对照组C2C12细胞相比，shDdah1组分化的C2C12细胞较少，

MyH4蛋白表达显著下调（P＜0.01），且分化融合后的肌管更薄更细（P＜0.01）。

3、与Ddah1f/f组小鼠相比，使用CTX诱导损伤和再生后，Ddah1MKO组小鼠

骨骼