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FLO6-GBSS1共相分离模块调控水稻淀粉合成
机理的初步探究
摘要
水稻是中国最重要的粮食作物，淀粉作为谷物的主要化学成分，其精细结构的调控
决定了大米的品质与产量。水稻淀粉的生物合成起始于叶片光合作用产生的蔗糖，在胚
乳中蔗糖通过蔗糖转运蛋白进入细胞质基质，经过一系列酶促反应后转化为G1P，进入
造粉体，然后在AGP酶催化下生成腺苷二磷酸葡萄糖(ADPG)。由G1P形成的ADPG
由颗粒结合型淀粉合酶(GBSS)催化合成直链淀粉。优化作物胚乳淀粉合成是未来作物育
种的重要方向之一。颗粒结合淀粉合成酶1(GBSS1)由蜡质基因(Wx)编码产生，是决定
作物直链淀粉合成的关键酶，对产量和品质有重要影响，但其活性调控机制并不清楚。
FLO6是直链淀粉合成酶Wx的互作调控蛋白，通过其CBM48结构域与淀粉结合。我
们前期的研究表明水稻FLO6可以在体内发生相分离形成凝聚体。本论文我们以FLO6
与Wx为功能模块开展研究，探究FLO6-Wx共相分离如何调控Wx活性进而调节水稻
淀粉合成的机理。具体结果如下:
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为了研究FLO6的生理功能，我们构建了FLO6突变体，发现FLO6突变体较野
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生型略微矮小，结实率少，直链淀粉含量也明显减少。为了验证日本晴FLO6(FLO6)
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在水稻胚乳内是否形成液滴行使功能。我们构建了表达FLO6-GFP融合蛋白的水稻过
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表达材料，通过对材料的胚乳进行切片制备并观察GFP荧光信号，发现FLO6-GFP荧
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光呈现点状信号，并附着在淀粉粒的表面。进一步对FLO6-GFP荧光进行荧光漂白恢
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复实验，证明FLO6-GFP凝聚体具有较高流动性，在胚乳细胞可以发生液-液相分离。
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为了进一步筛选日本晴FLO6(FLO6)相分离发生的关键区域，我们对FLO6蛋白
柔性指数进行了预测，结果发现FLO6具有三段不连续的内在无序区(Intrinsically
DisorderedRegions，IDR)，分别是:D1(42-92aa)，D2(133-262aa)，D3(375-418aa)。其中
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D1区位于信号肽区域。进一步我们构建了去除D2或者D3区的FLO6缺失突变体瞬
时表达质粒，通过原生质体瞬时转化实验，发现去除D3区的FLO6在细胞内凝聚体形
态发生改变，这说明D3区域是FLO6相分离的关键区域。同时，为了进一步的研究D3
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区域的生理功能，我们构建了FLO6回补FLO6突变体，发现可以完全恢复突变体表
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型，而将去除D3区的FLO6回补FLO6突变体材料则不能恢复，这表明FLO6相分
离的关键区域D3是调节直链淀粉关键区域。
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序列表明:粳稻FLO6(FLO6)与籼稻FLO6(FLO6)的蛋白序列在D3区域存在1个
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