兔肝DNA的提取二苯胺显色法测讲课文档.ppt

兔肝DNA的提取二苯胺显色法测;第一部分：生物基因组序列比对分析、分子进化;比较作图就是利用共同的遗传标记（主要是分子标记、基因的cDNA克隆以及基因组克隆）对相关物种进行物理或遗传作图，比较这些标记在不同物种基因组中的分布情况，提示染色体或染色体片段上的同线性（synteny）或共线性（collinearity），从而对不同物种的基因组结构及基因组进化历程进行精确分析。基因组比较作图的研究，不仅提示了同属甚至同科物种基因组间的同源性和差异性，对不同物种在起源、演化过程中的变化的研究具有巨大的启示作用。

比较作图的研究意义在于：一、根据不同种的基因组基因及其排列顺序的高度保守特点绘制而成的比较图，可以研究和探明它们的进化线索。广泛的比较作图可为多个种所用，建立它们之间的联系框架或系统。;基因组比对软件;一个最基本的假设是地球上所有物种都有一个共同的祖先，从这个祖先开始以数状形式发展，通常称为生命之树（treeoflife）。

分子进化研究的目的：通过序列同源性的比较，分析序列间的变化进而了解基因的进化以及生物系统发生的内在规律。

分子进化有两个主要研究对象，以全基因组序列为研究对象分析物种进化；以某基因在多个物种的同源序列为研究对象分析基因的进化;;基因分子进化分析步骤;（2）将上述同源基因的核酸或蛋白序列作序列比对，ClustalX;（3）构建系统发生树：MEGA，PHYLIP，PAUP;（4）评价所建立的树，分析其生物学意义;实验目的

学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原理和方法

掌握离心机及岛津UV-120的使用方法

;利用脱氧核糖核酸蛋白和核糖核酸在电解质中不同的溶解度使二者分离，在0.15M的氯化钠溶液中脱氧核糖核酸蛋白的溶解度最低。相反，核糖核蛋白能在0.15M氯化钠中溶解，因此可利用不同浓度的氯化钠溶液将核酸核蛋白、脱氧核糖核酸蛋白解离出来，而蛋白质变性沉淀，再用氯仿－异丙醇抽提，将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解。;实验操作;加约2倍

体积

95%乙醇;注意事项;加入15%SDS时要慢，边搅边滴加（两人配合）。

SDS的温度不能太低，易凝固。吸过SDS的吸管要及时清洗。

加???CHCl3/IAA液离心后，分为三层，由上到下为：无机相-蛋白相-有机相。DNA溶解在无机相中，吸取无机相时动作要轻，不要吸到蛋白相。

CHCl3/IAA会溶解有机玻璃，用完后不能竖直放置在试管架上，必须冲洗干净。;离心机的使用;二苯胺显色法测定DNA含量;取8支试管，按实验指导的表格加入试剂。

加毕置沸水浴10分钟，取出冷却；以0号管（空白管）调零点，于595nm波长比色。

以光密度为纵坐标，DNA含量（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线.

将实验中所得到的兔肝DNA溶液作为待测样品，取两只试管，分别标“U”和“B”，按表加入试剂。

混匀，置沸水中10min,取出冷却。

在595nm处，以B管调零，测得待测液的光密度值，从标准曲线上查出相当于该光密度值DNA的含量。;核酸在220-320nm处呈特征性吸收，在260nm处有最大吸收，测A260/A280可得知核酸的大致纯度。

A260/A280≈1.8表示DNA纯

1.8RNA含量高

1.8蛋白含量高;以0.01NNaOH为空白管，在260nm和280nm波长处测定样品液的吸光度，求出样品液的A260/A280比值和DNA浓度。;第三部分：目的基因SNP位点的鉴定及其意义;SNP对基因功能影响;目的基因SNP的查询;输入基因名称与物种名称，

如NGAL,homo;;;谢谢大家！