第二章 克隆技术.pptVIP

原代培养传代培养细胞培养瓶（即卡氏瓶）胰蛋白酶处理第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日接触抑制现象：细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞数量越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时就停止分裂增殖，即为接触抑制。第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日原代培养：即从机体取出后立即进行的细胞、组织培养传代培养：即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。原代培养一般是指从开始到传至10代细胞的培养传代培养一般指10-50代细胞的培养第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日细胞株：具有特殊性质的细胞系指在细胞培养过程中存活10代到40-50代的传代细胞细胞系：可连续传代的细胞指动物细胞培养过程中存活超过50代的细胞，可能在培养条件下无限制地传下去，具有了“不死性”，这种传代细胞称为细胞系。第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日海拉(HeLa)细胞系CHO细胞系第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日细胞克隆：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫做细胞克隆，也叫克隆培养法。细胞克隆的最基本要求是：必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个，即必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞。第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日第二章克隆技术什么是克隆（Clone）？克隆，就是无性繁殖系。个体通过无性繁殖可连续传代并形成群体，这样的群体称为无性繁殖系，即克隆。第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日无性繁殖有性繁殖：繁殖是生命区别于非生命的基本特征之一。繁殖指不经过两性生殖细胞的结合，由母体直接产生新个体的生殖方式经过两性生殖细胞的结合形成受精卵，由受精卵发育成新个体的生殖方式第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日分子水平：基因克隆细胞水平：组织培养技术细胞融合技术细胞核移植技术个体水平：生物的无性生殖细胞工程在不同水平上的克隆：第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日第二节植物的克隆植物组织培养技术植物体细胞杂交技术第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物组织培养：理论基础：植物细胞的全能性，即植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育为完整植株的潜能。植物细胞全能性的体现第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有全能性的特点。第7页，共49页，星期日，2025年，2月5日在生物的生长发育过程中，(没有离体的)细胞并不会表现出全能性，而是分化成各种组织和器官，这是因为在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会有选择性地表达出各种蛋白质，从而构成生物体的组织和器官。第8页，共49页，星期日，2025年，2月5日即细胞的分化是细胞在特定时间和空间条件下基因的选择性表达的结果。第9页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物的组织培养愈伤组织第10页，共49页，星期日，2025年，2月5日愈伤组织第11页，共49页，星期日，2025年，2月5日第12页，共49页，星期日，2025年，2月5日高度分化的组织形成愈伤组织离体培养形成幼根和芽形成完整植株脱分化过程再分化过程植物组织培养的过程第13页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物组织培养的条件：离体的植物组织或者器官给予适当的外界条件（无菌）第14页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物体细胞杂交技术就是将不同种的植物体细胞，在一定的条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。第15页，共49页，星期日，2025年，2月5日优点：生长期短，耐热性强，易于贮藏第16页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物体细胞杂交技术流程：物种2体细胞用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁物种1体细胞物种1原生质体物种2原生质体人工诱导物理法：离心、振荡、电刺激化学法：聚乙二醇(PEG)诱导剂再生细胞壁杂种细胞组织培养杂种植株第17页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物体细胞杂交技术流程图用纤维素酶和果胶酶处理人工诱导第18页，共49页，星期日，2025年，2月5日第19页，共49页，星期日，2025