酶工程 课件 第四章 酶的分离纯化与制剂制备.ppt

Bio-Rad伯乐一、层析技术（一）凝胶层析以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的分子量不同而达到分离的层析技术。1、原理大分子物质不能进入凝胶微孔，从凝胶间隙中以较快的速度流出小分子物质不断地进出微孔，向下移动速度变慢各组分按分子量由大到小顺序先后流出层析柱2、主要影响因素温度：低温（防止变性和提高收率）时间：短时溶液pH值：欲分离酶的pI附近样品浓度:0.5~2% 稀：溶剂用量大，回收率低，共沉作用小 浓：溶剂用量小，共沉作用强，分辨率低3、常用沉析剂乙醇：沉析作用强，挥发性适中，无毒；丙酮：沉析作用更强，用量省，毒性大；特点：介电常