猪瘟病毒抗体检测化学发光免疫分析方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA308—2025

非洲猪瘟病毒抗体检测化学发光免疫分析方法

ChemiluminescentimmunoassayfordetectionofantibodyagainstAfricanswinefevervirus

2025-10-28发布2025-10-28实施

中国兽医协会发布

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I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国农业科学院兰州兽医研究所提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州兽研生物科技有限公司、湖南省动物疫病预防控制中心。

本文件主要起草人：杨吉飞、敬梦瑶、包艳芳、吕律、牛庆丽、刘永杰、何莉、林密、蒋韬、唐小明、刘光远、关贵全、刘志杰、罗建勋、殷宏。

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非洲猪瘟病毒抗体检测化学发光免疫分析方法

1范围

本文件规定了非洲猪瘟病毒抗体检测化学发光免疫分析方法，包括试验原理、试剂、仪器设备及耗材、操作步骤和废弃物处理。

本文件适用于非洲猪瘟病毒抗体的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T18648非洲猪瘟诊断技术

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ASF：非洲猪瘟（Africanswinefever）

ASFV：非洲猪瘟病毒（Africanswinefevervirus）

BSA：牛血清白蛋白（Bovineserumalbumin）

CLIA：化学发光免疫分析（Chemiluminescenceimmunoassay）

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

NBSJ：抗ASFVp72蛋白抗体NBSJ（NanobodyNBSJagainstASFVp72protein）

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebuffersaline）

5原理

采用竞争原理，在酶标板上包被ASFVp72抗原，加入待检血清孵育，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗ASFVp72蛋白的抗体NBSJ孵育。当待检血清样本中存在ASFV抗体，则阻断了酶标记抗体NBSJ与酶标板中抗原的结合，加入底物后不显色；当待检样本中无ASFV抗体，酶标记抗体NBSJ能够与酶标

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板上的抗原结合，加入底物后，HRP催化底物显色；根据读取样品的化学发光值，可以定性判定样本中是否有非洲猪瘟病毒抗体。

6试剂

6.1ASFVp72抗原，制备方法见附录A。

6.2抗ASFVp72蛋白抗体NBSJ，制备方法见附录B。

6.3HRP标记抗ASFVp72蛋白抗体NBSJ，制备方法见附录C。

6.4阳性对照，见附录D.1。

6.5阴性对照，见附录D.2。

6.6包被缓冲液，见附录E.1。

6.7封闭液，见附录E.2。

6.8稀释液，见附录E.3。

6.925×浓缩洗涤液，见附录E.4。

6.10化学发光底物。

7仪器设备及耗材

7.1分析天平（精确度：0.0001g）。

7.237℃温箱。

7.32℃~8℃冰箱，-20℃冰箱。

7.4离心机。

7.5单道微量移液器（0.5μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1mL）。

7.6多道移液器（300μL）。

7.71.5mL尖底离心管。

7.8化学发光免疫分析仪。

7.9化学发光板。

7.10封板膜。

8样品采集、运输与保存

样品采集按照NY/T541规定进行。无菌采集猪全血不少于5mL，分离血清并置于无菌血清管中。若在1周内检测，可置2℃~8℃条件下保存；若超过1周检测，应置于-20℃以下冷冻保存。

样品的运输