3.2.1基因工程的基本操作程序 高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptxVIP

第3章基因工程第2节基因工程的基本操作程序（第一课时）高中生物学|人教版（2019）|选择性必修3·生物技术与工程

基因工程的基本操作程序目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定目的基因的表达产物（蛋白质）转基因生物

课程标准内容要求素养目标阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取，基因表达载体的构建、目的基因导入抽题细胞和目的基因及其表达产物的检测与鉴定等步骤。1.科学思维：结合生产实际，举例说出基因工程的基本操作程序。2.科学探究：针对人类生产和生活的某一需求，尝试提出初步的基因工程构想，完成初步设计。教学目标

目录CONTENTS目的基因的筛选与获取1基因表达载体的构建2将目的基因导入受体细胞3目的基因的检测与鉴定4

一、目的基因的筛选与获取1.目的基因在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。概念：数千种与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。实例：主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。【资料】苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。

一、目的基因的筛选与获取2.筛选适合的目的基因从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。【资料】苏云金杆菌在培育转基因抗虫棉之前，用苏云金杆菌制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害已有多年历史。研究表明：苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关，科学家不仅掌握了Bt基因的序列信息，也对Bt基因的表达产物——Bt抗虫蛋白有较为深入的了解。筛选方法：

随着测序技术的发展，以及序列数据库、序列比对工具等的应用，越来越多的基因的结构和功能为人们所知，这也为科学家找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能。技术支持：一、目的基因的筛选与获取2.筛选适合的目的基因DNA测序仪序列数据库（如GenBank）核苷酸序列比对氨基酸序列比对序列比对工具（如BLAST）

一、目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因概念：PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。发光生物提取?与发光有关的基因快速获得大量与发光有关的基因凯利·穆里斯

一、目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因阅读教材77~79页，结合体内DNA半保留复制的过程，归纳PCR的条件和过程。

一、目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因解旋原理：DNA的半保留复制合成子链

一、目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因DNA复制的基本条件：参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶（体外用高温代替）打开DNA双链DNA两条母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链2种引物(与两条母链结合)使DNA聚合酶能够从引物3′端开始连接脱氧核苷酸说明：PCR所用原料实为dNTP（即dATP、dTTP、dGTP、dCTP），dNTP和ATP类似，可以通过基团转移为反应提供能量。说明：PCR所用的DNA聚合酶为热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

一、目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因拓展PCR的原料实际加入是dNTP，dNTP是脱氧核苷三磷酸的缩写，N是指A、T、G、C四种含氮碱基，包括dATP、dGTP、dTTP、dCTP。它们是由两个磷酸分子和一个脱氧核苷酸组成的，其结构简式如下图：脱氧核苷酸dNTP分子中含有特殊化学键，在PCR过程中既是复制的原料，又为链的延长提供能量。当DNA聚合酶催化dNTP加入到DNA链时，dNTP会脱去一个焦磷酸（PPi），形成四种脱氧核苷酸，释放出能量，为DNA合成反应提供动力，驱动DNA聚合酶进行DNA链的延伸反应，保证PCR反应的顺利进行。ATCGP~P~P脱氧核糖含氮碱基脱氧核苷三磷酸酸PCR的原料——dNTP

一、目的基因的筛选与获取3.利用PCR获取和扩增目的基因拓展PCR的引物引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。扩增一段目的基因一般需要两个引物，分别与两条母链通过碱基互补配对。用于PCR的引物通常为20～30个核苷酸，在细胞中为一段单链RNA，在PCR中为一段人工合成的单链DNA。引物为DNA聚合酶提供了游离的3′端，使DNA聚合酶从3′端延伸子链。DNA聚合酶的特性：不能从头合成DNA，只有当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶才能从引物的3