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qPCR实验小问题2-筛选qPCR试剂，是不是扩增Ct值越小越好？
目前市面上的qPCR试剂五花八门，那我们筛选qPCR试剂时，是不是扩增Ct值越小越好呢？那显然是不是的，从下图可以看到，在某个Ct值的位置，有个焦点，但是显然，2个试剂做出的标准曲线斜率是不一样的，只有满足斜率在-3.58~-3.10之间，才是符合要求的试剂，那我们就从下面几个方面来进行解释，如何筛选试剂。
01试剂性能评估指标
01试剂性能评估指标
实验方法：实验采用的方法是\t/products_4/_blankSYBR法、荧光探针法，针对不同收集荧光的方法，有大量不同的试剂。
样本类型：模板是DNA，还是RNA，miRNA，有的还有血液直扩等。
基因GC含量：引物设计的原则GC含量在40%-60%之间，但是有的序列是高GC区，而且引物只能在此区域设计，那市面上也有针对高GC含量的扩增试剂，可供参考。
检出率：可以多设计几个基因，看检出率是否一致，市面上的几款试剂盒进行对比，比较检出率的高低。
特异性：特别是做SNP分型实验时，那特异性显得尤为重要，要区分野生型与突变型，因只有1个碱基的区别，高特异性的试剂是需要的。
扩增效率以及灵敏度：特别设计高丰度、中丰度以及低丰度表达的基因以及内参基因，同时做标准曲线，看试剂的扩增效率是否满足要求。
那如何判断做出来的标准曲线是符合预期的呢？需要满足以下要求：
①斜率在-3.58~-3.10之间。
②扩增效率在90%-110%之间。
③R2≥0.98。
④线性检测范围5-8个数量级。
重复性以及准确度：这是试剂最基本的要求。
扩增的高保真性能：有的酶经过优化，3端错配识别能力强，具有较强的高保真性能。
02从体验度指标来看
02从体验度指标来看
操作简便：
是否能够在室温下配置，还是必须在冰盒上操作；
是否可以兼容所有的仪器平台，还是只是适用某个厂家的仪器；
试剂是否带有颜色，带有颜色的试剂，可以清晰的看到哪个孔加样了，哪个孔没有加样，避免了很大一部分的操作误差。
例如：有一款试剂，酶MIX是蓝色的，模板稀释液稀释后的样本是黄色的，当将模板加到酶MIX后，呈现绿色，同时染料不影响荧光信号的采集和试剂的基础性能，特异性以及灵敏度没有降低。
体系配置的操作是否简单，有的将酶、PCRBuffer以及dNTPs等分开，那配置试剂时，就会比酶MIX复杂很多。
反应时间：有的试剂针对的PCR程序时间短，有的比较长，对于实验结果，我们肯定是想尽快看到实验结果的。
试剂的稳定性：试剂的有效期多久。
体系的稳定性：预混引物探针后分别经反复冻融等的处理，与-20℃对照组相比均无显著差异，表明试剂具有良好的预混稳定性。
防污染：引入的dUTP/UDG防污染系统，能有效防止气溶胶污染风险。
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