2026版《课堂新坐标》高三生物学一轮复习不定项版78选择性必修3第九单元第55讲重组DNA技术的基本工具.pptxVIP

;1．阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。2．实验：DNA的粗提取与鉴定。;一、基因工程的概念;二、基因工程的诞生和发展

1．肺炎链球菌转化实验不仅证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可在同种生物不同个体之间____。

2．DNA双螺旋结构的提出和__________的证明。

3．中心法则的确立。

4．________的破译。

5．基因转移载体的发现。_____________________________的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。;6．_____体外重组的实现。

7．重组DNA表达实验的成功。

8．DNA测序和合成技术的发明。

9．_____技术的发明。

10．__________技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。;三、重组DNA技术的基本工具

1．限制性内切核酸酶(也称“限制酶”);1．(人教版选择性必修3P71旁栏思考)存在于原核生物中的限制酶的作用是___________________________________________________

___________________________________________________________。;2．(人教版选择性必修3P71正文)用两种不同的限制酶切割目的基因的优点是___________________________________________________

___________________________________________________________。;2．DNA连接酶;3．载体;3．(人教版选择性必修3P72旁栏思考)DNA连接酶和DNA聚合酶的作用不相同，主要区别在于________________________________

___________________________________________________________。;4．(人教版选择性必修3P73正文)实践中常用某些病毒载体作为基因工程工具，除具备普通“质粒载体”的条件外，还应具有的条件是

___________________________________________________________

___________________________________________________________。;限制酶的选择要求

1．位置要求：限制酶的酶切位点不能位于启动子、终止子、复制原点、标记基因当中，所选酶切位点应位于启动子和终止子之间，若载体有多个标记基因，并非都不能破坏，要至少保留一个，用于重组DNA的鉴定和筛选。另外，目的基因上如果有该酶的酶切位点，不能选择。;2．酶切要求

(1)单酶切：为使目的基因与载体形成的DNA片段末端能够连接，通常使用同一种限制酶将两者切割(如下图，选用XhoⅠ)，但单酶切会出现目的基因??质粒的自身环化和随意连接，还可造成目的基因的多拷贝插入。;(2)双酶切：双酶切可以确保目的基因的正确插入，要求两个酶切位点位于目的基因的两侧，如下图可选择PstⅠ和BamHⅠ，但也要注意酶切位点个数和相对位置，如：不能选择XhoⅠ和BamHⅠ进行双酶切。另外，不同的限制酶所产生的末端相同，两端也可连接，因MunⅠ和EcoRⅠ酶切后产生的末端相同，可选择XhoⅠ和MunⅠ酶切目的基因，用XhoⅠ和

EcoRⅠ酶切质粒。;3．数量要求：如果所选限制酶的切割位点不止一个，如选择SmaⅠ进行酶切，则切割重组后会丢失复制原点，那么载体进入受体细胞后不能自主复制，所选限制酶在载体上最好只有一个酶切位点。;4．特殊要求：例如根据Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶，假设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ，则甲、乙、丁质粒均不宜选取，丙质粒宜选取。;1．基因工程的原理是基因重组，此变异是不定向的。 ();3．限制性内切核酸酶EcoRⅠ识别并切割双链DNA，用EcoRⅠ完全酶切果蝇基因组DNA，理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为4000。 ();我国科学家将蓝细菌ictB蛋白(能高效转运和浓缩CO2)的基因(ictB基因)与水稻叶绿体基因组中PSbA基因的启动子(叶片特异性表达)连接成重组DNA，然后将重组DNA与Ti质粒构建成表达载体，再导入水稻叶肉细胞的叶绿体中，最终成功获得了转ictB基因水稻，提高了水稻的产量。在ictB基因表达载体的构建中，含PSbA启动子和ictB基因的重组DNA分子和Ti质粒的酶切位点如图所示。;(1)为使重组DNA分子能定向插入Ti质粒的相应区段中，可在重组D