氨基酸纸层析糖旋光度的测定.pptVIP

第1页，共25页，星期日，2025年，2月5日1.学习层析（色谱）分离技术。2.学习旋光度测定技术。实验目的：第2页，共25页，星期日，2025年，2月5日一、氨基酸的纸色谱色谱法：根据不同溶质在固定相和流动相之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，在随着流动相经过固定相时，在两相之间形成多次平衡，被流动相带动移动的速度不同，达到分离效果的方法。固定相：固定不动，对样品产生保留作用的物质。流动相：带动样品，经过固定相的物质。色谱过程的实质：是样品在固定相中吸附与解析的过程。第3页，共25页，星期日，2025年，2月5日按分离机制，可分为：吸附色谱：分子在两相中吸附性能不同，进行分离分配色谱：分子在两相中分配系数不同，进行分离离子交换色谱：分子在两相中离子交换性能不同，进行分离体积排阻色谱：体积大的留在固定相的小孔内，体积小的先流出。亲和色谱：分子在两相中亲和力不同，进行分离。电泳色谱、电色谱：离子在电场中移动的速度不同进行分离色谱法分类第4页，共25页，星期日，2025年，2月5日按操作方式不同，又可分为：柱色谱气相色谱高效液相色谱薄层色谱纸色谱等固定相组分第5页，共25页，星期日，2025年，2月5日纸色谱：为分配色谱，滤纸为载体，固定相为滤纸上的水分，流动相（展开剂）为用水饱和过的有机溶剂。操作技术：上行法、下行法、环行法第6页，共25页，星期日，2025年，2月5日纸色谱、薄层色谱的一般操作步骤第7页，共25页，星期日，2025年，2月5日1.制板（纸）第8页，共25页，星期日，2025年，2月5日将一个1.5cm长、1cm宽的滤纸，剪成扇子状，并卷起来滤纸芯儿的制作第9页，共25页，星期日，2025年，2月5日在滤纸中央，用铅笔画一个半径0.5cm的圆圈（直径一角硬币大小）。在圆圈中心扎一个孔，插入准备好的滤纸芯儿。插入时，滤纸芯的扇花部分插进滤纸孔一小部分，以盖到培养皿上方时不碰到液体为准。第10页，共25页，星期日，2025年，2月5日2.点样毛细管点样：毛细管与板（纸）垂直，点样位置、点样距离：不被展开剂浸泡、以显色后点之间易分开为准。点样量、样品浓度：轻轻点一次即可。本次实验：点三个样品——两个标准样品，一个混合样品第11页，共25页，星期日，2025年，2月5日3.展开将薄层板斜放入层析缸中（或将滤纸挂在层析缸中），层析缸中流动相（展开剂）的量以不浸泡样点为宜。有些层析缸如下图，易进行先饱和后展开操作，提高重现性和避免边缘现象。边缘现象：两边高第12页，共25页，星期日，2025年，2月5日本次纸色谱实验展开步骤：1.在培养皿中加入适量展开剂2.把点好样的滤纸放到培养皿上，注意滤纸芯儿不能碰展开剂。盖上培养皿饱和5~10分钟。3.把滤纸芯儿压下去，使滤纸芯儿的另一端稍微扇开，并接触展开剂，开始展开。4.当流动相（展开剂）的前沿到达滤纸边1cm左右时，停止展开，立即取出滤纸，用铅笔画出展开剂前沿线。5.去溶剂：烘干展开剂前沿线饱和展开画出展开剂前沿第13页，共25页，星期日，2025年，2月5日4.显色可见光下观察紫外灯下观察显色剂显色：通用：10%硫酸乙醇溶液；碘蒸气；大部分有机样品：磷钼酸/乙醇溶液专用：碘化铋钾—生物碱；三氯化铁—黄酮；茚三酮—氨基酸显色操作：将茚三酮喷至滤纸润湿，不易流淌第14页，共25页，星期日，2025年，2月5日5.计算比移值Rf值的意义：定性分析的指标评价展开剂选择是否合适、评价分离效果薄层层析：Rf0.30～0.80，△Rf≥0.05纸层析：Rf0.05～0.85，△Rf≥0.05第15页，共25页，星期日，2025年，2月5日2、影响旋光度的因素测定波长、浓度、测定管长度、溶剂、温度比旋光度：旋光管长度，dm第16页，共25页，星期日，2025年，2月5日第17页，共25页，星期日，2025年，2月5日第18页，共25页，星期日，2025年，2月5日