第二章 生化反应工程.pptVIP

第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日2.1酶促反应动力学的特点2.1.1酶的基本概念2.1.2酶的稳定性及应用特点酶是以活力、而不是以质量购销的。酶有不同的质量等级：工业用酶、食品用酶、医药用酶。酶的实际应用中应注意，没有必要使用比工艺条件所需纯度更高的酶。第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日经典酶学研究中，酶活力的测定是在反应的初始短时间内进行的，并且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液，酶学研究的目的是探讨酶促反应的机制。工业上，为保证酶促反应高效率完成，常需要使用高浓度的酶制剂和底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系，有时反应是在有机溶剂中进行。第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日2.2均相酶促反应动力学2.2.1酶促反应动力学基础可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。对酶促反应，有：式中，k：酶促反应速率常数；r：酶促反应速率；rA：以底物A的消耗速率表示的酶促反应速率；rP：以产物P的生成速率表示的酶促反应速率。第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日对连锁的酶促反应，第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日2.2.2单底物酶促反应动力学2.2.2.1米氏方程根据酶－底物中间复合物假说，对单底物酶促反应，其反应机制可表示为：第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日快速平衡法推导动力学方程：几点假设：（1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。（2）不考虑这个可逆反应。（3）为快速平衡，为整个反应的限速阶段，因此ES分解成产物不足以破坏这个平衡。第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日解之，得令则根据假设建立动力学方程第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日稳态法推导动力学方程：几点假设：（1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。（2）不考虑这个可逆反应。（3）CSCE中间复合物ES一经分解，产生的游离酶立即与底物结合，使中间复合物ES浓度保持衡定，即。第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日解之，得令则根据以上假设，可建立如下方程组第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日米氏方程rrmaxrmax/2KmCS图2－1酶浓度一定时底物浓度对反应速率的影响第11页，共36页，星期日，2025年，2月5日对米氏方程的讨论：当CSKm时，，属一级反应。当CSKm时，，属零级反应。当CS＝Km时，。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。第12页，共36页，星期日，2025年，2月5日双倒数法(LinewearBurk):对米氏方程两侧取倒数，得,以作图，得一直线，直线斜率为，截距为,根据直线斜率和截距可计算出Km和rmax。第13页，共36页，星期日，2025年，2月5日－1／Km1／rmax1／r斜率－Km/rmax1／CS图2－2双倒数法求解Km和rmax第14页，共36页，星期日，2025年，2月5日2.2.2.2抑制剂对酶促反应速率的影响失活作用抑制作用竞争性抑制非竞争性抑制第15页，共36页，星期日，2025年，2月5日竞争性抑制非竞争性抑制EISESI第16页，共36页，星期日，2025年，2月5日竞争性抑制反应机理：第17页，共36页，星期日，2025年，2月5日快速平衡法推导动力学方程：解之，得，式中:第18页，共36页，星期日，2025年，2月5日采用稳态法推导动力学方程：第19页，共36页，星期日，2025年，2月5日解之，得式中:第20页，共36页，星期日，2025年，2月5日非竞争性抑制反应机理第21页，共36页，星期日，2025年，2月5日快速平衡法推导动力学方程解之，得式中:第22页，共36页，星期日，2025年，2月5日稳态法推导动力学方程：第23页，共36页，星期日，2025年，2月5日解之，得