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再生医学RT-PCR检测工程师岗位考试试卷及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.RT-PCR中“RT”代表？

A.逆转录

B.实时

C.随机引物

D.放射性标记

答案：A

2.以下哪种酶用于逆转录过程？

A.Taq酶

B.逆转录酶

C.限制性内切酶

D.DNA连接酶

答案：B

3.RT-PCR反应体系不包括以下哪种成分？

A.dNTP

B.引物

C.模板DNA

D.缓冲液

答案：C

4.实时荧光定量RT-PCR常用的荧光化学物质是？

A.溴酚蓝

B.吖啶橙

C.SYBRGreen

D.伊红

答案：C

5.逆转录的模板是？

A.DNA

B.mRNA

C.tRNA

D.rRNA

答案：B

6.RT-PCR可用于检测？

A.基因表达水平

B.蛋白质含量

C.细胞活性

D.细胞周期

答案：A

7.设计RT-PCR引物时，引物长度一般为？

A.5-10bp

B.15-30bp

C.35-50bp

D.50bp以上

答案：B

8.进行RT-PCR实验时，RNA提取后首先要检测？

A.纯度和浓度

B.分子量

C.碱基组成

D.二级结构

答案：A

9.以下哪种情况会导致RT-PCR结果假阳性？

A.引物特异性差

B.RNA降解

C.模板量不足

D.反应温度过低

答案：A

10.RT-PCR实验中，PCR循环的正确顺序是？

A.退火、变性、延伸

B.变性、退火、延伸

C.延伸、变性、退火

D.变性、延伸、退火

答案：B

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.RT-PCR实验中可能用到的仪器有？

A.离心机

B.移液器

C.荧光定量PCR仪

D.电泳仪

答案：ABCD

2.逆转录过程需要的条件有？

A.模板mRNA

B.dNTP

C.逆转录酶

D.引物

答案：ABCD

3.影响RT-PCR结果的因素包括？

A.RNA质量

B.引物设计

C.反应体系

D.循环参数

答案：ABCD

4.实时荧光定量RT-PCR的优点有？

A.灵敏度高

B.特异性强

C.能准确定量

D.操作简单

答案：ABC

5.RT-PCR可应用于以下哪些领域？

A.疾病诊断

B.药物研发

C.基因功能研究

D.细胞治疗

答案：ABCD

6.提取RNA时常用的试剂有？

A.Trizol试剂

B.氯仿

C.异丙醇

D.乙醇

答案：ABCD

7.以下哪些是合格RNA的特征？

A.A260/A280在1.8-2.0之间

B.无明显DNA污染

C.完整性好

D.有蛋白质杂质

答案：ABC

8.设计RT-PCR引物时需要考虑的因素有？

A.引物特异性

B.引物Tm值

C.引物长度

D.引物GC含量

答案：ABCD

9.RT-PCR实验中防止RNA降解的措施有？

A.实验环境清洁

B.操作在冰上进行

C.使用RNase抑制剂

D.延长实验时间

答案：ABC

10.PCR反应中，缓冲液的作用包括？

A.提供合适的酸碱度

B.提供离子强度

C.稳定酶活性

D.作为模板

答案：ABC

三、判断题（每题2分，共10题）

1.RT-PCR只能检测mRNA的表达。（×）

2.逆转录酶可以将DNA逆转录成RNA。（×）

3.实时荧光定量RT-PCR不需要引物。（×）

4.RNA提取过程中，可以用手触摸枪头。（×）

5.引物设计不合理可能导致RT-PCR扩增失败。（√）

6.进行RT-PCR实验时，样本可以反复冻融。（×）

7.SYBRGreen能与双链DNA结合发出荧光。（√）

8.模板量越高，RT-PCR结果越好。（×）

9.实验中使用的耗材都需要经过RNase处理。（√）

10.RT-PCR可以检测基因的突变情况。（×）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述RT-PCR的基本原理。

答案：先通过逆转录酶将RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板，利用Taq酶等进行PCR扩增，通过引物特异性结合目标基因序列，经过变性、退火、延伸循环，实现对特定基因的扩增，从而检测基因表达水平。

2.提取RNA时应注意哪些问题？

答案：要注意环境清洁，避免RNase污染；操作在低温下进行，防止RNA降解；使用的试剂和耗材需无RNase污染；准确控制各试剂用量和操作时间，保证RNA的纯度和完整性。

3.实时荧光定量RT-PCR与普通RT-PCR的区别是什么？

答案：普通RT-PCR只能定性或半定量分析基因表达，而实时荧光定量RT-PCR能在PCR扩增过程中实时监测荧光信号，通过标准曲线准确定量初始模板量，灵敏度和准确性更高。

4.如何判断RT-PCR实验结果的可靠性？

答案：从RNA质量判断，如纯度和完整性；看引物设计是否合理；观察扩增曲线和熔解曲线是否正常；与已知样本对比；重复实验结果是否一致，都能辅助判断结果可靠性。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.在再生医学研究中，RT-PCR检测工程师如