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HIV-1病毒载量测定及质量保证指南

引言

HIV-1病毒载量（HIV-1ViralLoad,VL）测定是监测人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染者病毒复制水平、评估抗病毒治疗效果、预测疾病进展以及判断治疗失败的关键实验室指标。准确、可靠的病毒载量结果对于指导临床决策、优化个体治疗方案、实现病毒抑制目标乃至控制HIV传播具有至关重要的意义。本指南旨在为从事HIV-1病毒载量测定的实验室和相关人员提供一套系统、规范的操作与质量保证框架，以期提高检测质量，确保结果的准确性和可比性。

一、HIV-1病毒载量测定的原理与方法学概述

HIV-1病毒载量测定主要基于核酸扩增技术，通过检测患者血浆或血清中HIV-1RNA的拷贝数来定量病毒的复制水平。

1.1常用方法学简介

目前，临床实验室广泛应用的病毒载量测定技术主要包括逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、基于核酸序列的扩增技术（NASBA）以及转录介导的扩增技术（TMA）等。这些技术均具备较高的敏感性和特异性，但在具体操作流程、扩增效率、线性范围及检测限等方面存在一定差异。

*RT-PCR技术：该技术首先将病毒RNA逆转录为cDNA，随后以cDNA为模板进行PCR扩增，通过检测扩增产物的量来推算原始病毒RNA的浓度。其发展经历了从终点PCR到实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的过程，后者因操作简便、闭管检测减少污染、定量精确等优点而成为目前的主流。

*其他扩增技术：如NASBA和TMA技术，均为等温扩增技术，无需PCR仪的温度循环，扩增效率高，对某些病毒亚型的检测可能具有优势。

1.2方法学选择与性能参数

实验室在选择病毒载量测定方法时，应综合考虑其临床需求、样本量、预算以及方法学本身的性能特点。关键的性能参数包括：

*线性范围：方法能够准确定量的病毒载量上下限。

*检测限（LOD）：方法能够稳定检测出的最低病毒RNA浓度，通常以拷贝数/毫升表示。

*精密度：包括批内和批间精密度，反映方法的重复性。

*特异性：对HIV-1不同亚型的检测能力，以及排除其他病原体干扰的能力。

*抗干扰能力：对常见标本干扰物（如溶血、脂血、黄疸）的耐受程度。

二、标本的采集、处理与运输

高质量的标本是获得可靠病毒载量结果的前提。

2.1标本类型

最常用的标本类型为EDTA抗凝全血。血浆是病毒载量测定的最佳基质。血清虽也可用于检测，但可能因凝血过程导致病毒RNA损失，一般不作为首选。在特殊情况下，如无法采集全血，某些方法学可能支持driedbloodspot(DBS)标本，但需注意其敏感性和准确性可能有所降低，并遵循特定的操作规范。

2.2标本采集

*采集前准备：向患者解释采集目的和过程，确认患者身份。通常无需空腹。

*采集容器：使用真空采血管（紫色帽，含EDTA-K2或EDTA-K3抗凝剂）。确保管子无破损，有效期内使用。

*采集过程：严格无菌操作，采集足够体积的全血（通常为几毫升，具体参照所用检测试剂盒要求及实验室SOP）。采集后立即轻轻颠倒混匀数次，确保抗凝剂与血液充分混合，避免凝血。

*标识：清晰、准确地标记患者信息（姓名、唯一识别号、采集日期和时间）。

2.3标本处理

*及时离心：全血标本采集后应尽快（通常建议在数小时内，最迟不超过采集后几小时，具体参照试剂盒说明书）于2-8°C条件下离心分离血浆。离心条件一般为相对离心力（RCF）约____×g，离心时间约10-15分钟。

*血浆分离：离心后，用移液器小心吸取上层血浆至洁净、无菌的螺口塑料管中。避免吸入白细胞层（Buffycoat）。可根据需要分装成小份，便于多次检测或存档。

*标本标记：分离后的血浆标本管同样需要清晰标记患者信息及分离日期和时间。

2.4标本储存与运输

*短期储存：若在24-48小时内进行检测，分离后的血浆可暂存于2-8°C冰箱。

*长期储存：如需长期保存，应将血浆置于-70°C或以下冰箱冷冻保存。避免反复冻融，否则会导致RNA降解。建议分装保存。

*运输：

*冷藏运输：在2-8°C条件下运输，适用于短途且能在短时间内送达的情况。

*冷冻运输：使用足量的冰袋或干冰确保标本在运输过程中保持冷冻状态（-20°C以下，最好-70°C）。

*生物安全：标本运输需严格遵守国家和地方关于生物危险品运输的规定，使用符合要求的包装。

*运输文件：随附必要的申请单和交接记录。

三、实验室检测操作与质量控制

3.1标准操作程序（SOP）

实验室应建立并严格执行HIV-1病毒载量测定的SOP，内容包括但不限于：标本接收与处理、试剂准备、仪器操作、检测步骤、结果判读、质量控制、废物处理、生物安