2025年上海市医疗机构临床基因扩增检验技术人员PCR上岗证考试题含答案.docxVIP

2025年上海市医疗机构临床基因扩增检验技术人员PCR上岗证考试题含答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.实时荧光定量PCR中，Ct值的定义是：

A.扩增产物达到平台期的循环数

B.荧光信号首次超过设定阈值的循环数

C.荧光信号达到最大峰值的循环数

D.基线期结束时的循环数

答案：B

2.以下哪种物质不是PCR反应体系的必需成分？

A.模板DNA

B.dNTP

C.逆转录酶

D.TaqDNA聚合酶

答案：C（逆转录酶仅用于RT-PCR）

3.临床基因扩增实验室分区中，最严格禁止的操作是：

A.在试剂准备区进行样本处理

B.在样本处理区配制反应体系

C.在扩增区进行加样操作

D.在产物分析区使用与其他区共用的移液器

答案：C（扩增区含大量扩增产物，加样易导致污染）

4.引物设计时，避免3’端互补的主要目的是：

A.减少引物二聚体形成

B.提高扩增特异性

C.增加扩增效率

D.降低Tm值

答案：A（3’端互补易形成引物二聚体）

5.荧光探针法中，TaqMan探针的工作原理基于：

A.荧光共振能量转移（FRET）

B.分子信标构象变化

C.杂交后荧光基团暴露

D.扩增产物与探针结合后淬灭解除

答案：A（探针5’端荧光基团与3’端淬灭基团距离近时无荧光，Taq酶降解探针后分离发光）

6.临床PCR检测中，内参基因的主要作用是：

A.监测扩增效率

B.排除假阳性

C.验证样本核酸提取质量

D.定量目标基因

答案：C（内参基因用于判断样本是否有效，排除提取失败导致的假阴性）

7.实验室发生气溶胶污染时，最有效的处理措施是：

A.紫外线照射30分钟

B.75%乙醇擦拭台面

C.次氯酸钠（10%）浸泡

D.过氧乙酸熏蒸

答案：D（过氧乙酸可有效降解核酸气溶胶，紫外线对封闭空间内气溶胶穿透力有限）

8.以下关于PCR反应退火温度的描述，正确的是：

A.应高于引物Tm值5-10℃

B.应低于引物Tm值5℃左右

C.与引物长度无关

D.退火时间越长扩增效率越高

答案：B（退火温度通常设置为引物Tm值减3-5℃，确保引物与模板有效结合）

9.检测HBVDNA时，若阴性对照出现扩增曲线，最可能的原因是：

A.样本核酸提取量过高

B.引物特异性不足

C.扩增产物污染

D.热启动酶未激活

答案：C（阴性对照应无扩增，出现信号提示污染）

10.下列哪种方法不能用于PCR产物的定性分析？

A.琼脂糖凝胶电泳

B.实时荧光监测

C.限制性内切酶酶切

D.测序

答案：B（实时荧光用于定量，定性需通过电泳或测序确认产物大小）

11.核酸提取过程中，加入蛋白酶K的主要目的是：

A.裂解细胞膜

B.降解RNA

C.消化蛋白质杂质

D.沉淀DNA

答案：C（蛋白酶K水解蛋白质，防止其抑制后续扩增）

12.实时荧光PCR仪的温度均匀性应控制在：

A.±0.1℃

B.±0.5℃

C.±1.0℃

D.±2.0℃

答案：B（临床检测要求温度均匀性≤±0.5℃，否则影响扩增一致性）

13.以下哪种情况会导致扩增曲线呈“平台期提前”？

A.模板浓度过高

B.引物浓度过低

C.dNTP浓度不足

D.Taq酶量不足

答案：A（高浓度模板会提前消耗反应底物，导致平台期提前）

14.实验室生物安全柜的使用中，错误的操作是：

A.操作前开机运行10分钟

B.物品放置于柜内中后部

C.操作时手臂频繁进出

D.操作后用75%乙醇擦拭内壁

答案：C（频繁手臂进出会破坏气流屏障，增加污染风险）

15.检测新型冠状病毒RNA时，选择N基因作为靶标的主要原因是：

A.保守性高，变异少

B.扩增效率低，避免假阳性

C.序列长度短，易扩增

D.表达量低，需高灵敏度检测

答案：A（N基因在冠状病毒中保守，适合作为通用检测靶标）

16.PCR反应体系中，Mg2+浓度过高可能导致：

A.引物二聚体减少

B.扩增特异性下降

C.产物量减少

D.Taq酶失活

答案：B（Mg2+浓度过高会降低引物与模板的特异性结合，增加非特异性扩增）

17.以下哪种物质不属于PCR抑制物？

A.血红蛋白

B.肝素

C.基因组DNA

D.胆盐

答案：C（基因组DNA是模板，高浓度可能抑制但非外源性抑制物）

18.室内质控中，连续3次检测结果均偏离均值+2SD，应采取的措施是：

A.继续检测，观察趋势

B.重新校准仪器

C.更换试剂批次

D.停止检测，查找失控原因

答案：D（连续3次超出2SD属于失控，需立即排查原因）

19.逆转录PCR（RT-PCR）中，反转录的最佳温度通常为：

A.25℃

B.37℃

C.50℃

D.72℃

答案：C（