第六章 菌种复壮衰退及保藏.pptVIP

优点：低温、干燥、无氧、无营养，保藏效果好，时间可达几年至数十年。缺点：只适用于产孢子的微生物，不能用于保藏营养细胞。第29页，共44页，星期日，2025年，2月5日（4）冷冻干燥保藏法操作方法：是将液体样品（含保护剂的菌悬液）在冻结状态下升华其中水分，最后达到干燥。培养物用无菌脱脂牛奶—保护剂制成菌悬液，加入安瓶中，冷冻、抽真空、封口。第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日一、菌种的衰退与复壮

（一）衰退

1.定义衰退（degeneration）是指由于自发突变的结果，而是某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。菌种的衰退是发生在微生物细胞群中的一个由量变到质变的逐步演化过程。第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日菌种原有的典型性状变得不典型时就称菌种退化，这种变异也称负变（minusmutation）。影响微生物菌种稳定性的因素：a）变异；b）污染；c）死亡；第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日例如，微生物菌落形态或个体形态的变化；生长速度缓慢，产孢子量减少；色素产生情况的变化；研究菌种遗传标记的丢失，生产菌种生产性状的劣化等。第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日2.衰退的原因造成菌种退化的主要原因是基因突变。误区生产工艺条件控制不当杂菌污染造成生产性能下降饰变第6页，共44页，星期日，2025年，2月5日3.衰退的防止（1）选育生产性能稳定的菌株作为生产菌株经诱变等处理后的菌种要连续传代、分离纯化，防止分离回复。（2）控制传代次数尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少自发突变的几率。第7页，共44页，星期日，2025年，2月5日（3）创造良好的培养条件创造一个适合原种的生长条件，就可在一定程度上防止菌种衰退；例如，给予营养缺陷型适当的营养必需成分，可降低回复突变频率。第8页，共44页，星期日，2025年，2月5日（4）利用不同类型的细胞进行接种传代放线菌和霉菌一般用单核的孢子接种的，菌丝细胞常含有几个细胞核，甚至是由异核体组成的，用于接种就易出现离异（dissociation）或衰退。例如，构巢曲霉如用分生孢子接种易退化；如用子囊孢子接种则不易退化。第9页，共44页，星期日，2025年，2月5日（5）采用有效的菌种保藏方法菌种保藏的温度、所用的培养基等可影响自发突变。第10页，共44页，星期日，2025年，2月5日（二）菌种的复壮（rejuvenation）

1.定义狭义的复壮：是指菌种已发生衰退后，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。是一种消极的措施第11页，共44页，星期日，2025年，2月5日广义的复壮：在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。是一项积极的措施第12页，共44页，星期日，2025年，2月5日通过纯种分离把退化菌种的细胞群中仍保持原有典型性状的单细胞分离出来，扩大培养，就可恢复正常。（1）纯种分离法（purecultureisolation）1.复壮的方法第13页，共44页，星期日，2025年，2月5日纯种分离的方法“菌落纯”水平（purecultureincolonylever）“菌株纯”水平（purecultureinstrainlever）粗放精细第14页，共44页，星期日，2025年，2月5日第15页，共44页，星期日，2025年，2月5日（2）通过宿主体复壮针对病原菌从典型的病灶部分分离到恢复原始独立的复壮菌株衰退的病原菌接种相应的昆虫或动、植物宿主体内活的“选择性培养基”多次选择第16页，共44页，星期日，2025年，2月5日（3）淘汰已衰退的个体S.microflavus“5406”农用抗生菌的分生孢子，采用－10～－30℃的低温处理5～7天，退化的个体死亡，留下的10％～20％个体是未退化的。第17页，共44页，星期日，2025年，2月5日二、菌种的保藏菌种（culture，stockculture）是一种极其重要和珍贵的生物资源。菌种保藏（