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砷暴露对小鼠学习记忆功能的影响：基于miR-219/CaMKⅡ通路的机制探究

一、引言

1.1研究背景

砷（Arsenic）作为一种广泛存在于自然界的非金属元素，在环境中的分布极为广泛，其化合物种类繁多。在日常生活里，人们可能通过多种途径接触到砷，像饮用受污染的水、食用含砷量超标的食物，以及呼吸被砷污染的空气等。从全球范围来看，砷污染问题日益严峻。例如，一项新研究发现，全球可能有多达2.2亿人面临饮用水被砷污染的危险。世界卫生组织（WHO）官网发布的资料称，无机砷是危害全球公众健康的十大化学物质之一，其无机形式有剧毒。

砷对人体健康的危害是多方面且严重的。急性砷中毒时，主要损害胃肠道系统、呼吸系统、皮肤和神经系统，症状表现为疲乏无力、呕吐、皮肤发黄、腹痛、头痛及神经痛，甚至会引起昏迷，严重者会因神经异常、呼吸困难、心脏衰竭而死亡。慢性砷中毒则主要反映在皮肤、头发、指（趾）甲和神经系统方面，比如皮肤干燥、粗糙、头发脆而易脱落，掌及趾部分皮肤增厚、角质化，神经系统方面会出现多发性神经炎，感觉迟钝、四肢端麻木乃至失知感，行动困难、运动失调等。尤其对于儿童而言，砷中毒还可能损害智力和生长发育。在2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，砷和无机砷化合物被归为一类致癌物；2019年7月23日，砷及其化合物被列入有毒有害水污染物名录（第一批）。

在众多砷对人体的危害中，其对神经系统的影响逐渐成为研究的重点领域。神经系统在人体的生命活动中起着至关重要的调节作用，而学习记忆功能又是神经系统高级功能的重要体现。已有大量研究表明，砷暴露可导致学习记忆功能障碍等神经系统毒性。比如中国科学院城市环境研究所环境健康研究组通过分析无机砷（NaAsO?）暴露对雄性大鼠（F0代）海马组织的影响，发现砷暴露后大鼠的学习记忆能力显著降低，学习记忆相关基因Bdnf、c-Fos、mGlur1、Nmdar1、Gria2表达下调。然而，目前对于砷导致学习记忆损伤的具体分子机制，尚未完全明确。深入探究这一机制，对于全面了解砷的神经毒性，以及制定有效的防治措施具有重要意义。所以，本研究聚焦于砷介导海马miR-219/CaMKⅡ通路损伤小鼠学习记忆功能的机制，期望能为解决砷污染带来的健康问题提供新的思路和理论依据。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究砷介导海马miR-219/CaMKⅡ通路损伤小鼠学习记忆功能的具体机制。通过构建小鼠砷暴露模型，运用行为学测试评估小鼠学习记忆能力的变化，借助分子生物学技术检测海马组织中miR-219和CaMKⅡ的表达水平及相关信号通路的激活情况，分析它们之间的相互作用关系，从而揭示砷致小鼠学习记忆损伤的潜在分子机制。

从理论意义层面来看，本研究有助于进一步明晰砷对神经系统的毒性作用机制，特别是在学习记忆功能损伤方面，丰富了砷神经毒理学的理论体系。深入探究miR-219/CaMKⅡ通路在其中的介导作用，能够为理解神经系统疾病的发病机制提供新的视角和思路，推动神经科学领域的理论发展。从实际应用价值角度而言，研究结果可以为砷污染地区的人群健康风险评估提供科学依据，帮助相关部门制定更加精准有效的防治策略，降低砷暴露对人体健康的危害。此外，也可能为开发针对砷中毒及相关神经系统疾病的治疗靶点和药物提供理论支持，具有重要的临床应用前景，对保护人类健康、提高生活质量具有积极的现实意义。

1.3研究方法与技术路线

本研究采用动物实验与分子生物学技术相结合的方法。在动物实验方面，选用健康成年小鼠，随机分为对照组和不同剂量砷暴露组。通过饮水途径给予小鼠亚急性砷暴露，定期检测饮水中砷的浓度，确保暴露剂量稳定。运用Morris水迷宫实验、Y迷宫实验等行为学测试方法，检测小鼠的学习记忆能力。在分子生物学技术方面，利用实时荧光定量PCR技术检测海马组织中miR-219的表达水平；采用蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测CaMKⅡ及相关信号通路蛋白的表达量；运用免疫组织化学法观察相关蛋白在海马组织中的定位和分布情况；借助双荧光素酶报告基因实验验证miR-219与CaMKⅡ的靶向关系。

技术路线如下：首先，进行实验动物的准备和分组，构建小鼠砷暴露模型。接着，在规定的时间内对小鼠进行砷暴露处理，并定期检测饮水中砷浓度。然后，在暴露结束后，对小鼠进行行为学测试，评估其学习记忆能力。与此同时，处死小鼠并采集海马组织样本。随后，对海马组织样本进行处理，分别用于实时荧光定量PCR、Westernblot、免疫组织化学和双荧光素酶报告基因实验等分子生物学检测。最后，对实验数据进行统计分析，总结结果并得出结论，深入探讨砷介