酶促反应动力学(共109张课件).pptxVIP

酶促反应动力学;

化学反应的两个基本问题：

反应进行的方向、可能性和限度

反应进行的速率和反应机制;

（一）反应速率及其测定

——以单位时间内反应物或生成物

浓度的改变来表示。;

（二）反应分子数和反应级数

1.反应分子数：

——反应中真正相互作用的分子的数目

单分子反应：AP

双分子反应：A+BP+Q;单分子反应

v=kc

双分子反应

v=kc1c2

c、c1、c2：反应物浓度（mol/l）

k：比例常数/反应速率常数;

能以v=kc表示，为一级反应；

能以v=kc1c2表示，则为二级反应；

v与反应物浓度无关，则为零级反应。;

（三）各级反应的特征

1.一级反应：

反应速率与反应物浓度的一次方成正比。

v=kc

;;

2.二级反应：

v=k（a-x）（b–x）

a、b：反应物A、B的初浓度

x：t时已发生反应的物质浓度

（a-x）、（b–x）：t时后A、B的浓度

;：v=k;单底物、单产物反应；

酶促反应速度一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示；

反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度；

底物浓度远远大于酶浓度。（[S]》[E]）;产

物;在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度的影响呈矩形双曲线关系。;当底物浓度较低时;随着底物浓度的增高;当底物浓度高达一定程度;E+SESP+E;（二）酶促反应的动力学方程式;1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程(Michaelisequation)。;稳态时ES浓度不变

反应速度

V=k3[ES]

ES的生成速度=消耗速度

k1[E][S]=k2[ES]+k3[ES]

E的质量平衡方程

[E]=[Et]-[ES]

;;稳态时ES浓度不变

反应速度

V=k3[ES]

ES的生成速度=消耗速度

k1[E][S]=k2[ES]+k3[ES]

E的质量平衡方程

[E]=[Et]-[ES]

;a.当[S]很小时

V=V[S]/Km一级反应;Km=?;2、动力学参数??意义;①Km是酶的特性常数：

与pH、温度、离子强度、酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。;②可以判断酶的专一性和天然底物;;④Km可帮助判断某代谢反应的方向和途径

催化可逆反应的酶对正/逆两向底物Km不同

——Km较小者为主要底物

;乳酸脱氢酶（1.7×10-5）;（2）Vmax和k3（kcat)的意义

一定酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数。

[S]很大时，Vmax＝k3[E]。

k3表示当酶被底物饱和时，每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，

——又称为转换数、催化常数kcat

kcat越大，酶的催化效率越高;（3）kcat/km的意义：;是E和S反应形成产物的表观二级速率常数。其大小可用于比较酶的催化效率。;（1）Lineweaver-Burk双倒数作图法;蔗糖酶米氏常数（Km）的测定;（2）Eadie-Hofstee作图法;v;（3）Hanes-Woolf作图法;斜率=1/Vm;v;（三）多底物的酶促反应动力学;Km越小，亲和力越强。

（1）E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即V＝k3[ES]。

——与酶中金属离子形成稳定的络合物

——在A的浓度达到饱和时B的米氏常数

?

竞争性抑制(competitiveinhibition)

∴亲合标记试剂（affinitylabelin