基因的工程试题及问题详解.pdfVIP

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作业一：

一、名词解释：

1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸

序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。

2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子

3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然

后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成

某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。

4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在

真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启

动子、增强子样结构统称启动子。

5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约20

0bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核

生物中都发现了增强子。增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件

构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。

6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转

变成具有生物活性的蛋白质分子。

二、简答题

1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。

答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序

号.基本原则:3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号;首字母:取属名的第一个

字母,且斜体大写;第二字母:取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母:(1)取种名的第二

个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四

字母:若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体.顺序

号:若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.

2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？

答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，

即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序

列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二

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活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。

概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：

(1)高甘油含量(5％,v／v)；

(2)限制性内切核酸酶用量过高(100U／ugDNA)；

(3)低离子强度(25mmol／L)；

(4)高pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；

(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。

3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？

答：（1）DNA的纯度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反应的温度（4）DNA的分子

结构（5）核酸内切限制酶的缓冲液

4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？

答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中

大片段的分子量为75kDa，它具有5-3聚合酶和3-5外切核酸酶的活性，小片段具有5-3

外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5引物的5-3外切核酸酶的活

性，所以在基因工程中更有用。

Klenow酶主要有下列用途：

(1)修复反应，制备平末端

可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5或3突出末端，制备平末端，

这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放

射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3末端标记的探针。

用Klenow酶修复5突出末端的反应主要是利用了Klenow酶的DNA聚合酶活性，是填补

反应；而修复3突出末端则是用Klenow