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主讲人:薄层色谱技术在植物
色素分离中的应用
CONTENTS目录01薄层色谱技术概述02植物色素概述03技术分离植物色素的原理04技术分离植物色素的操作流程
CONTENTS目录05技术在植物色素分离中的应用案例06技术应用的优势与局限性07技术应用的未来发展趋势
薄层色谱技术概述01
技术定义分离原理定义利用不同物质在固定相和流动相之间的吸附和解吸附差异实现分离。操作流程定义将样品点在薄板上,用合适溶剂展开,从而分离植物色素。应用范围定义常用于植物色素、药物成分等混合物的快速分离检测。
发展历程起源阶段20世纪初,茨维特发明色谱法,为薄层色谱技术奠定基础。初步发展20世纪50年代,薄层色谱技术诞生,开始用于植物成分分析。成熟完善如今,该技术不断改进,在植物色素分离等领域广泛应用。
应用领域化妆品行业分析化妆品含有的植物色素,确保产品质量和安全性。制药领域分离中药里的植物色素,助力有效成分的研究与提取。食品工业食品中植物色素的检测,如检测饮料中天然色素成分和含量。
植物色素概述02
植物色素的种类叶绿素植物进行光合作用的关键色素,如菠菜中就富含叶绿素。类胡萝卜素包括胡萝卜素等,胡萝卜、番茄中含量丰富。花青素使植物呈现红、蓝等色,蓝莓、紫薯含大量花青素。
植物色素的分布果实中的分布叶片中的分布绿色植物叶片含叶绿素等,如菠菜叶富含叶绿素a和b。成熟果实色素丰富,如番茄含番茄红素呈红色。花朵中的分布花朵色彩源于色素,像玫瑰花瓣含花青素显红色。
植物色素的功能吸引传粉者花朵艳丽的花青素吸引蜜蜂等昆虫传粉,像玫瑰就靠它吸引昆虫。保护植物类黄酮能抵御紫外线等伤害,例如葡萄皮中的类黄酮保护果实。提供营养胡萝卜素可转化为维生素A,为人体补充营养,如胡萝卜富含该色素。
技术分离植物色素的原理03
吸附原理固定相吸附硅胶等固定相通过表面活性位点吸附植物色素,如硅胶吸附叶绿素。不同色素与固定相吸附力有差异,像黄酮与花青素吸附程度不同。用流动相使吸附的色素解吸,例如乙醇可解吸胡萝卜素。吸附选择性解吸过程
分配原理溶解度差异分配不同植物色素在溶剂中溶解度不同而分配,像胡萝卜素和叶黄素。吸附和解吸分配植物色素在固定相上吸附和解吸,实现分离,如叶绿素的分离。固定相和流动相分配在薄层色谱中,植物色素在固定相硅胶与流动相溶剂间分配,如菠菜色素。
离子交换原理离子交换剂选择色素离子吸附洗脱与收集选用合适离子交换剂,如强酸性树脂,用于分离植物色素离子。植物色素离子与交换剂上离子交换,像花青素被交换吸附。用洗脱剂使色素离子从交换剂上解吸,收集分离色素。
分子排阻原理洗脱顺序原理固定相孔径选择依据植物色素分子大小选合适孔径固定相,如分离叶绿素用特定孔径。按分子大小决定洗脱先后,大的先出柱,实现色素分离。分子大小筛分大色素分子难入孔径被先洗脱,小的后流出,像花青素与叶黄素。
亲和原理不同色素在固定相和流动相分配系数不同,像类胡萝卜素借此分开。硅胶板对植物色素选择性吸附,如叶绿素易被硅胶吸附实现分离。吸附亲和分配亲和
技术分离植物色素的操作流程04
薄层板的制备常用玻璃板作底板,如显微镜载玻片,稳定且易操作。选择合适底板将硅胶等吸附剂与溶剂混合,像硅胶与水调制成均匀浆料。调制吸附剂浆料用涂布器把浆料均匀涂在底板上,制成厚度一致的薄层板。涂布浆料于底板
样品的预处理将洗净植物粉碎成匀浆,如把蓝莓打成细腻的果浆便于提取。样品粉碎匀浆从野外或种植地采集新鲜植物,如菠菜、胡萝卜等用于后续分析。植物样品采集用清水洗净植物,去除泥土、杂质,像清洗玫瑰花瓣那样操作。样品清洗除杂
点样操作确定点样位置距薄层板底边1-2cm处点样,确保分离顺利进行。选择合适的点样器常用毛细管点样器,如微量毛细管,能精准吸取样品溶液。控制点样量一般点样量为几微升,像5微升可保证分离效果。
展开剂的选择选与色素结构相似展开剂,像分离胡萝卜素用石油醚。参考相似相溶原理若分离不佳,调整展开剂比例,如调整乙酸乙酯比例。依据展开效果调整分离极性植物色素,常用甲醇-水展开剂,如分离花青素。考虑植物色素极性
展开过程选择展开剂依据植物色素性质选合适展开剂,如分离叶绿素常用石油醚-丙酮。展开操作将点样后的薄板放入展开缸,展开剂上升分离不同色素。控制展开时间精确控制时间使色素有效分离,如分离花青素约20分钟。
显色方法利用紫外灯照射,使植物色素在薄层板上发出荧光,如叶绿素等。紫外光显色喷洒特定化学试剂,与色素反应显色,例香草醛-浓硫酸试剂。化学试剂显色借助生物活性物质与色素作用显色,如酶与特定色素的反应。生物显色
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