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生物学基础细胞结构实验指导

一、实验目的

1.观察并识别植物细胞和动物细胞的基本结构，理解细胞是生物体结构和功能的基本单位。

2.学习并掌握光学显微镜的正确操作方法，包括低倍镜和高倍镜的使用。

3.学习临时装片的制作技术，掌握生物材料的处理和染色方法。

4.培养细致的观察能力、绘图能力以及分析和归纳实验现象的能力。

5.初步形成生物体结构与功能相统一的基本生物学观点。

二、实验原理

细胞是生物体形态结构和生命活动的基本单位。绝大多数细胞个体微小，需借助光学显微镜进行观察。光学显微镜利用凸透镜的成像原理，将微小物体放大到人眼可见的程度。其放大倍数为目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。

不同类型的细胞具有相似的基本结构，如细胞膜、细胞质和细胞核。植物细胞在这些基本结构之外，通常还具有细胞壁、液泡，部分植物细胞还含有叶绿体。由于细胞本身大多无色透明，为了更清晰地观察其内部结构，常需要使用染色剂对细胞进行染色，以增加结构间的对比度。例如，碘液可将植物细胞的细胞核和淀粉粒染成深色；亚甲基蓝溶液可将动物细胞的细胞核染成蓝色。

三、实验材料与用具

（一）实验材料

1.植物材料：洋葱鳞片叶内表皮细胞（或紫鸭跖草叶下表皮细胞、菠菜叶下表皮细胞等）。

2.动物材料：人口腔上皮细胞。

（二）实验用具

1.仪器：光学显微镜、载玻片、盖玻片、刀片（或剃须刀片）、镊子、解剖针、滴管、吸水纸（或擦镜纸）、培养皿、铅笔（HB、2B、3B）、绘图纸、尺子。

2.试剂：清水、生理盐水（0.9%NaCl溶液）、碘液（或稀释的亚甲基蓝溶液）。

四、实验步骤

（一）植物细胞（洋葱鳞片叶表皮细胞）的观察

1.临时装片的制作

*擦片：用洁净的纱布（或擦镜纸）轻轻擦拭载玻片和盖玻片，确保无油污和杂质，以免影响观察。

*滴水：在载玻片中央滴一滴清水。水量要适中，过多易溢出，过少则细胞易干涸。

*取材：取洋葱鳞片叶，用刀片在其内侧（或外侧，根据老嫩程度选择）划一个约0.5cm见方的“井”字，用镊子小心撕取一小块透明的薄膜状内表皮。注意尽量取单层细胞，避免撕取过厚。

*展平：将撕下的洋葱表皮细胞迅速放入载玻片中央的水滴中，用解剖针或镊子轻轻将其展平，避免细胞重叠或卷曲。

*盖片：用镊子夹起盖玻片，使盖玻片的一侧先接触载玻片上的水滴边缘，然后缓缓放下，盖在洋葱表皮上。此操作的目的是防止产生气泡，若有少量气泡，可在盖玻片一侧滴加清水，另一侧用吸水纸吸引，尝试将气泡赶出。

2.染色（可选操作，视观察需求而定）

*在盖玻片的一侧滴加1-2滴碘液（或亚甲基蓝溶液）。

*用吸水纸在盖玻片的另一侧吸引，使染液通过盖玻片下方渗透到细胞中，对细胞进行染色。染色时间不宜过长，以免过度染色影响观察。

3.显微镜观察

*对光：将显微镜放置在平稳的实验台上，略偏左。打开光圈，上升镜筒，转动转换器，使低倍物镜（通常是10×物镜）对准通光孔。左眼注视目镜，右眼睁开（便于绘图和观察记录），调节反光镜（光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜），直至视野内呈现明亮均匀的圆形光斑。

*放置装片：将制作好的临时装片放在载物台上，用压片夹固定，使观察对象（洋葱表皮）位于通光孔的正中央。

*低倍镜观察：转动粗准焦螺旋，使镜筒缓慢下降，直至物镜接近（但切勿触碰）装片。此时左眼注视目镜，反向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓慢上升，直至视野中出现清晰的物像。如果物像不在视野中央，可移动装片将其移至中央。仔细观察细胞的形态和排列方式，识别细胞壁、细胞质、细胞核等结构。

*高倍镜观察（若需要）：在低倍镜下找到理想的观察区域并将其移至视野中央。转动转换器，换用高倍物镜（通常是40×物镜）。注意转换物镜时要小心，避免物镜碰到装片。换用高倍镜后，视野亮度可能变暗，可调节光圈或反光镜增加亮度。此时，只能转动细准焦螺旋微调，直至物像清晰。观察细胞更细微的结构。

（二）动物细胞（人口腔上皮细胞）的观察

1.临时装片的制作

*擦片：同植物细胞装片制作。

*滴液：在载玻片中央滴一滴生理盐水（0.9%NaCl溶液），其作用是维持动物细胞的正常形态，防止细胞因吸水膨胀或失水皱缩。

*取材：用清水漱口，清除口腔内食物残渣。用消毒牙签（或洁净的棉签）的钝端，在自己口腔内侧壁轻轻刮取几下（注意动作要轻柔，避免损伤黏膜）。

*涂抹：将牙签（或棉签）上附有碎屑的一端，轻轻涂抹在载玻片中央的生理盐水中，使细胞分散开来。

*盖片：操作同植物细胞，注意避免产生气泡。

2.染色

*方法同植物细胞染色，常用亚甲基蓝溶液或稀碘液。染色后，细胞核等结构会被染成深色，更易观察。

3.显微镜观察

*操作步骤同植物细胞的显微镜