己烯雌酚残留检测实验.pptxVIP

己烯雌酚残留检测Diethylstilbestrolresiduedetection药物残留检测技术动物药学院学院:时菲菲主讲教师：

实验的原理己烯雌酚是一种人工合成的非甾体雌激素，常在畜牧养殖业中被作为促生长剂使用，易在动物肝脏、脂肪、肌肉、乳汁中沉积。被世界卫生组织国际癌症研究机构列为一类致癌物，接触后甚至可对后代产生致癌影响。《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(GB31650－2019)。根据新版限量标准要求，己烯雌酚在动物源食品中不得检出。

实验的原理酶联免疫吸附法是一种较为理想的食品中药物残留检验方法操作简便准确度高常用食品中雌激素检测方法电化学分析法色谱法免疫分析法

酶联免疫吸附法方法原理：每种抗体都有其特异性识别和结合的抗原。主要用于检验抗体。待测抗体和酶标抗体与固相抗原结合，洗涤后加入底物显色，用分光光度计等仪器检验反应产物的颜色，可以得到待测抗体的含量。主要用于检验小分子抗原。待测抗原会和固相抗原竞争结合定量的抗体。如果待测抗原含量多，能与抗体结合的固相抗原就会减少。所以加入底物显色后，颜色越浅，说明待测抗原含量越高。主要用于检验大分子抗原，一般是二价或二价以上的抗原。在固相抗体上加入待测抗原，再加上酶标抗体，洗涤后加入底物反应显色。如果待测抗原的含量高，那经过显色反应后的颜色会更深，所以可以对待测大分子抗原进行定性和定量分析。间接法竞争法夹心法类型

酶联免疫吸附法本次实验采用简介竞争ELISA方法检测猪肝中的己烯雌酚，检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的己烯雌酚和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗己烯雌酚抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含己烯雌酚含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中己烯雌酚的残留量。根据中华人民共和国国家标准农业部1163号公告-1-2009制定了这次实验的实验方案，该实验方案适用于猪肉、猪肝、虾等动物性食品中己烯雌酚残留量的快速筛选检测。

用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值的比值进行计算相对吸光度值（％）＝B/B0×100%B为标准（试样）溶液的吸光度值B0为空白溶液，即浓度为0标准溶液的吸光度值。将计算的相对吸光度值（％）对应已烯雌酚标准品浓度(μg/L)的自然对数作图，对应的试样浓度可从校正曲线算出，乘以其对应的稀释倍数即为样本中已烯雌酚的实际浓度。如果方法筛选的样品结果为阳性，需要用确证方法进行验证。结果判定和表述

注意事项室温低于25℃或试剂样本没有回到室温会导致所有标准的OD值偏低。在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。在所有孵育过程中用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。显色液若没有任何颜色表明变质。反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。

随着我国养殖产业规范化程度的不断提高，畜牧业的产业化发展进程不断加快，动物性食品已经成为食品需求的核心，兽药的使用也愈发广泛。有效控制动物性食品中兽药残留的检验与管理，加强行业的规范化监督管理标准显得尤为重要。同学们也应该学好检验检测技术，发挥专业特长，为保障人类食品安全贡献力量。

己烯雌酚残留检测Diethylstilbestrolresiduedetection动物药学院学院:感谢观看时菲菲主讲教师：