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发酵工程制药技术

蛋白纯化新技术—磁珠法

随着近年来生物行业的飞速发展，蛋白纯化是很多生物行业研究人员经常遇到的实

验，当我们利用微生物或细胞表达出目标蛋白后，下一步就需要将该目标蛋白从含有众

多杂蛋白或其它杂质的发酵液中纯化出来。纯化蛋白最传统的方法主要使用的是层析的

方式，该方式由于技术成熟，层析填料种类比较完善，容易进行放大生产，因此其作为

蛋白纯化最广泛使用的方法的地位毫无动摇。然而，对于前期的研发阶段，面对大量的

样品，如果使用层析的方法，则会耗费大量的时间用于重复纯化过程，不利于效率的提

升，因此本文通过介绍一种新型的可用于蛋白高通量纯化的方法—磁珠纯化方法。

磁珠纯化的工作原理：磁珠可以被抗原、抗体、蛋白质或者核酸的特异性亲和配体

通过共价键的方式偶联包裹，实现磁珠可以从含有目标物质的样品中对该目标物质特异

性的结合，并且在外界磁场的吸引下可以做定向移动，从而达到分离、检测、纯化的目

的。

磁珠纯化与传统预装柱纯化蛋白对比：

操作的方便性

以从大肠杆菌中纯化亲和标签蛋白为例，磁珠纯化蛋白简化实验操作，无需高速离

心、过滤、上样等操作，仅需要孵育、洗涤、洗脱步骤。而使用层析的方式则需要将大

肠杆菌破碎液离心，并将收集的上清液过滤，上样，洗杂，洗脱步骤，其纯化过程相对

繁琐。

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②操作时间

时间是科研的高成本，传统预装柱纯化一个蛋白需要2~4h，而磁珠纯化蛋白仅需

要不到1小时的时间，磁珠纯化蛋白更加节省时间成本。此外使用磁珠纯化蛋白时一个

人可以同时纯化十几个甚至几十个样品，真正的实现高通量纯化；而使用层析的方式则

受限于仪器一次只能纯化一个样品，纯化多个样品时则只能通过增加仪器数量或者延长

纯化时间进行。

纯化设备

实验室实验条件有限，没有完善的仪器设备是困扰很多蛋白纯化研究人员最重要的

难题。一般来说，使用层析的方式纯化蛋白需要高速离心机、AKTA蛋白纯化仪，这些

仪器相对昂贵，并且在设备的使用和维护上需要花费较多精力。而磁珠纯化蛋白仅需要

孵育器、磁性分离器这种小型的实验设备即可，使蛋白纯化更加简单方便和低成本。

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④纯化效果

省时、操作简便、设备简单在蛋白纯化过程中属于锦上添花，作为蛋白纯化实验本

身来说，纯化效果才是重中之重！根据磁珠和层析的方法纯化蛋白的经验，对于蛋白浓

度高(0.5mg/mL)的样品，磁珠纯化的蛋白回收率一般会高于层析的方法，而对于蛋白

浓度含量低(0.1mg/mL)的样品，磁珠纯化的蛋白回收率一般会低于层析的方法。

⑤做免疫沉淀(IP)实验

免疫共沉淀属于一种与抗原和抗体之间的专一性作为基础，用于研究蛋白质相互作

用的方式，同时也可以确定两种蛋白质完整细胞内生理性相互作用的方法。使用磁珠代

替传统填料的方式做免疫沉淀的优点见下图。