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基于转录组测序剖析武昌罗索线虫性别分化基因功能

一、引言

1.1研究背景

1.1.1武昌罗索线虫概述

武昌罗索线虫（RomanomermiswuchangensisBao）隶属于线虫动物门（Nematode）无尾感器纲（Aphasmidia）嘴刺亚纲（Enoplea）索线虫目（Mermithida）索科（Mermithidae）罗索属（Romanomermis）。自1985年被鲍学纯等人首次发现并报道以来，作为一种重要的昆虫病原线虫，武昌罗索线虫在昆虫生物防治领域逐渐崭露头角。

武昌罗索线虫具有广泛的分布范围，在我国多个地区均有发现，展现出良好的生态适应性。其繁殖能力较强，对宿主具有较高的寄生率，最高可达70%。这种线虫的生活史涵盖卵、幼虫和成虫三个阶段。在适宜的室温条件下（26-30℃），卵会经历一系列有序的发育阶段，从最初的单胞期，逐步发展为二胞期、多胞期、囊胚期、原肠期，最终在74小时后发育为蝌蚪形幼虫期。幼虫又可细分为寄生前期幼虫、寄生期幼虫和寄生后期幼虫。其中，寄生前期幼虫具备主动寻找宿主并钻入宿主体腔的能力，这一特性使得武昌罗索线虫在昆虫生物防治中潜力巨大。进入宿主后，线虫会在特定时间内进行蜕皮，在寄生后期，它会在宿主胸部体腔内横向缠绕多圈，完成寄生生活后从宿主体内脱出。

在应用研究方面，众多学者针对武昌罗索线虫进行了大量田间试验。骆启桂、罗大民等人的研究表明，释放武昌罗索线虫寄生前期幼虫对不同地区、不同生态环境中的致乏库蚊和三带喙库蚊均能起到较好的控制效果。当寄生前期幼虫的释放剂量控制在7000-10000条/m2时，可有效控制投放水域的孑孓密度，防治效果达到75-85%。尽管如此，当前对于武昌罗索线虫的研究仍主要集中在生物学特性和田间应用层面，对于其性别分化机制，特别是从分子层面的探索还极为有限。

1.1.2性别分化的研究意义

性别分化是生物个体发育过程中的关键环节，在生物进化和发育生物学领域具有举足轻重的地位。从生物进化的角度来看，性别分化是生物适应环境、推动种群进化的重要基础。通过有性生殖，不同性别个体的基因得以重新组合，极大地增加了遗传多样性，为自然选择提供了丰富的素材，进而推动物种的进化和适应。在发育生物学范畴内，性别分化涉及一系列复杂而精细的基因调控网络和信号传导通路，深入研究这一过程，有助于我们从本质上理解生物体的生长、发育和繁殖机制。

对于武昌罗索线虫而言，性别分化研究同样具有独特的价值。性别比例的平衡直接关系到种群的稳定和繁衍能力，深入探究其性别分化机制，能够为优化武昌罗索线虫的大规模培养和应用提供坚实的理论支撑。例如，在利用武昌罗索线虫进行生物防治时，了解性别分化机制有助于精准调控其种群性别比例，提高防治效果和效率。此外，对其性别分化机制的研究也将丰富线虫发育生物学的理论体系，为深入理解线虫类生物的生殖和发育规律开辟新的路径，在基础研究和应用研究方面都具有不可忽视的重要意义。

1.2转录组测序技术及其应用

转录组测序技术（RNA-Seq）是一种基于新一代测序技术的研究手段，能够全面、深入地揭示生物体在特定生理状态下的基因表达谱。其基本原理是将细胞中的RNA逆转录为cDNA，构建cDNA文库后，利用高通量测序技术对cDNA进行测序，从而获得大量的转录本序列信息。与传统的基因表达分析技术相比，转录组测序技术具有诸多显著优势。它无需预先知晓物种的基因组序列信息，即可对转录本进行全面的鉴定和分析，这为研究基因组信息未知的物种提供了极大的便利。该技术具有超高的灵敏度和分辨率，能够检测到低丰度表达的基因，还能准确识别基因的可变剪接、融合基因以及新的转录本等，为基因结构和功能的研究提供了丰富的数据。

在生物性别分化研究领域，转录组测序技术已经取得了一系列令人瞩目的成果。在中国农业大学动物科学技术学院杨宁教授、孙从佼副教授团队与中国农业科学院深圳农业基因组研究所易国强研究员课题组的合作研究中，他们通过对发育早期不同阶段的雌性和雄性鸡胚胎性腺进行单核转录组测序（snRNA-seq）和染色质可及性测序（snATAC-seq），成功剖析了鸡性别决定相关基因、顺式调控元件和转录因子等分子特征，明确了雌鸡和雄鸡性腺之间细胞组成和发育轨迹的差异，鉴定出驱动支持细胞谱系形成的特异性转录因子和调控网络，为家禽性别控制技术的开发奠定了坚实的理论基础。

在木薯性别决定相关基因的挖掘研究中，韦丽君、俞奔驰等人以木薯雄蕾、雌蕾和两性蕾为实验材料，运用IlluminaHiSeq?4000测序平台进行转录组测序。通过生物信息学分析，他们不仅获得了高质量的测序数据，还成功筛选出大量与木薯性别决定相关的差异表达基因，并对这些基因的功能和参与的信号通路进行了深入