猪卵泡发育过程中颗粒细胞内参基因表达稳定性分析.pdfVIP

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南京农业大学学报２０２４ꎬ４７(４):７１０７２０ｈｔｔｐ://ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＤＯＩ:１０.７６８５/ｊｎａｕ.２０２３０６０１９

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霍泱安ꎬ李小雪ꎬ孙郴ꎬ等.猪卵泡发育过程中颗粒细胞内参基因表达稳定性分析[Ｊ].南京农业大学学报ꎬ２０２４ꎬ４７(４):７１０７２０.

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猪卵泡发育过程中颗粒细胞内参基因表达稳定性分析

霍泱安ꎬ李小雪ꎬ孙郴ꎬ李齐发ꎬ杜星∗

(南京农业大学动物科技学院ꎬ江苏南京２１００９５)

摘要:[目的]本研究旨在分析猪卵泡发育不同阶段颗粒细胞中内参基因的表达稳定性ꎬ筛选有效内参基因用于鉴定猪卵泡发

育关键调控基因及其表达模式ꎮ[方法]基于形态学观察与类固醇激素检测分离猪腔前、有腔、成熟和闭锁卵泡ꎬ并收集相应

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颗粒细胞ꎻ利用ＲＴ￣ｑＰＣＲ检测甘油醛３磷酸脱氢酶(ＧＡＰＤＨ)、β肌动蛋白(ＡＣＴＢ)、ＡＴＰ合酶Ｆ１(ＡＴＰ５Ｆ１)、β２微球蛋白

(Ｂ２Ｍ)、真核翻译伸长因子１α(ＥＥＦ１Ａ１)、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶１(ＨＰＲＴ１)、核糖体蛋白Ｓ３(ＲＰＳ３)、微管蛋白α￣１ｂ

(ＴＵＢＡ１Ｂ)和泛素Ｃ(ＵＢＣ)等９个候选内参基因在猪卵泡不同发育阶段颗粒细胞中的表达水平ꎻ综合ΔＣｔ、ｇｅＮｏｒｍ、

ＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒ、ＢｅｓｔＫｅｅｐｅｒ和ＲｅｆＦｉｎｄｅｒ等算法分析候选内参基因在猪卵泡发育过程中的表达稳定性ꎮ[结果]候选内参基因在猪

卵巢颗粒细胞中的表达水平存在较大差异ꎬ其中ＥＥＦ１Ａ１和ＴＵＢＡ１Ｂ的表达水平较高ꎬ而ＨＰＲＴ１和ＵＢＣ的表达水平较低ꎻ不

同算法得到的稳定性存在差异ꎬ用ΔＣｔ、ＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒ和ＢｅｓｔＫｅｅｐｅｒ分析发现ＲＰＳ３和ＡＴＰ５Ｆ１的稳定性较高ꎬ用ｇｅＮｏｒｍ分析发

现ＧＡＰＤＨ和ＨＰＲＴ１的稳定性较高ꎬ最终利用ＲｅｆＦｉｎｄｅｒ进行综合权重分析得出候选内参基因的稳定性从高到低依次为

ＲＰＳ３、ＡＴＰ５Ｆ１、ＨＰＲＴ１、ＥＥＦ１Ａ１、ＧＡＰＤＨ、ＡＣＴＢ、ＴＵＢＡ１Ｂ、Ｂ２Ｍ、ＵＢＣꎮ进一步以不同表达稳定性内参基因为参照对母猪繁殖力

候选基因ＦＳＨＲ和ＮＯＲＦＡ在卵泡发育过程中的表达模式进行检测ꎬ结果表明内参基因稳定性对准确鉴定目的基因表达水平

和变化模式至关重要ꎮ[结论]ＲＰＳ３和ＡＴＰ５Ｆ１在猪卵泡发育过程中具有较高的表达稳定性ꎬ可作为有效内参基因用于后续

猪卵泡发育相关研究ꎬ为鉴定猪卵泡发育关键调控基因及其表达模式等相关内参基因研究提供理论依据ꎮ

关键词:猪ꎻ卵泡发育ꎻ卵巢颗粒细胞ꎻＲＴ￣ｑＰＣＲꎻ内参基因ꎻ表达稳定性分析