DB22-T 2598-2016 人参中吲哚乙酸和吲哚丁酸的测定 液相色谱-质谱-质谱法.docxVIP

DB22T人参中吲哚乙酸和吲哚丁酸的测定液相色谱质谱质谱法

本标准规定了人参中吲哚乙酸和吲哚丁酸含量的液相色谱质谱质谱测定方法。本标准适用于人参及其制品中吲哚乙酸和吲哚丁酸含量的测定。

本标准的方法检出限：吲哚乙酸为0.01mg/kg，吲哚丁酸为0.01mg/kg；定量限：吲哚乙酸为0.03mg/kg，吲哚丁酸为0.03mg/kg。

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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测

本标准中，下列术语和定义适用。

3.1吲哚乙酸Indole3aceticacid,IAA

分子式：C10H9NO2，相对分子质量：175.18，CAS号：87514。

3.2吲哚丁酸Indole3butyricacid,IBA

分子式：C12H13NO2，相对分子质量：203.24，CAS号：133324。

3.3液相色谱质谱质谱法Liquidchromatographytandemmassspectrometry,LCMS/MS

以液相色谱为分离手段，质谱为检测手段的联用技术，通过多级质谱分析实现对目标化合物的定性和定量分析。

4原理

试样中的吲哚乙酸和吲哚丁酸经甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，采用C18色谱柱分离，以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式，多反应监测（MRM）模式检测，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1甲醇：色谱纯。

5.2甲酸：色谱纯。

5.3乙腈：色谱纯。

5.4甲醇水溶液（1+1，v/v）：量取100mL甲醇和100mL水，混匀。

5.50.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸，用水定容至1000mL，混匀。

5.6吲哚乙酸标准品：纯度≥98%，CAS号：87514。

5.7吲哚丁酸标准品：纯度≥98%，CAS号：133324。

5.8标准储备溶液：分别准确称取吲哚乙酸和吲哚丁酸标准品各10.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，于18℃避光保存，有效期3个月。

5.9混合标准中间溶液：分别准确吸取1.0mL吲哚乙酸和吲哚丁酸标准储备溶液，置于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准中间溶液，于4℃避光保存，有效期1个月。

5.10混合标准工作溶液：准确吸取适量混合标准中间溶液，用甲醇水溶液（1+1，v/v）逐级稀释，配制成浓度为0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L的系列混合标准工作溶液，现用现配。

5.11固相萃取柱：HLB固相萃取柱，200mg/6mL，或相当者。

5.12微孔滤膜：0.22μm，有机相。

6仪器和设备

6.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

6.3离心机：转速≥4000r/min。

6.4涡旋混合器。

6.5超声波清洗器。

6.6氮吹仪。

6.7固相萃取装置。

6.8pH计：精度±0.02。

6.9组织匀浆机。

6.10离心管：50mL，聚丙烯。

6.11容量瓶：10mL、100mL、1000mL。

6.12移液器：10μL、100μL、1000μL、5000μL。

7试样制备与保存

8分析步骤

8.1提取

称取2.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入20mL甲醇水溶液（1+1，v/v），涡旋混合2min，超声提取30min，以4000r/min离心5min，取上清液于另一离心管中。残渣重复提取一次，合并上清液，待净化。

8.2净化

将HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL水活化，取10mL提取液过柱，弃去流出液。用5mL水淋洗，抽干。用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液，于40℃氮吹至近干，用1.0mL甲醇水溶液（1+1，v/v）溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜，供液相色谱串联质谱测定。

a)色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm，或相当者；

b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为甲醇；

c)梯度洗脱程序：0min2min，10%B；2min8min，10%90%B；8min10min，90%B；10min10.1min，90%10%B；10.1min15min，10%B；

d)流速：0.3mL/min；

e)