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细胞培养基质量标准及检查方法

中国医药生物技术协会

四月

编写说明

根据中国医药生物技术协会2023年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。

本标准以《中国药典》2023版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T3935-2023）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊规定制定，增长了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。

本标准分为细胞培养基检查项目和每个项目的检查方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。

结果评估

依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检查，所有项目均符合标准规定，鉴定该样品为合格；若有一项不符合标准规定，则鉴定样品为不合格。

细胞培养基质量标准及检查方法

细胞培养基质量标准

细胞培养基质量应符合表1所示的技术规定。

表1技术规定

检查项目

限度规定

检查方法

澄清度

澄清

中华人民共和国药典2023年版二部附录ⅨB进行。

pH值（每升标示量/L）

pH允许偏差范围为±0.30

中华人民共和国药典2023年版附录ⅥH进行。

渗透压（mOsm/kgH2O）

渗透压允许偏差范围为±5％

中华人民共和国药典2023年版二部附录ⅨG渗透压摩尔浓度测定法进行。

干燥减量的质量分数（%）

≤5.0

按中华人民共和国药典2023年版二部附录ⅧL干燥失重测定法进行。

细菌内毒素（EU/ml）

≤10

按中华人民共和国药典2023年版附录ⅪE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。

微生物限度

细菌数（CFU/g）

≤200

按中华人民共和国药典2023年版附录ⅪJ微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。

霉菌数（CFU/g）

≤50

细胞生长实验（vero细胞）

细胞形态

成纤维样贴壁生长，形态正常无变异

按中华人民共和国化工行业标准《哺乳类动物细胞培养基》HG/T3935-2023第7.7条进行。

细胞数量

培养72h细胞数量不低于1×105cells/ml；继续维持48h细胞数量不低于1×105cells/ml

牛血清白蛋白

不得检出

依据中华人民共和国药典2023年三部附录ⅧI牛血清白蛋白残留量测定法进行，不得检出牛血清白蛋白。

抗生素

不得检出

依据中华人民共和国药典2023年三部附录ⅨA抗生素残留量测定法进行，不得检出青霉素、链霉素及庆大霉素。

检查方法

除非另有说明，检查中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2023年版中规定的纯化水。

2.1澄清度的测定

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2023年版二部附录ⅨB进行。

2.2pH值的测定

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2023年版三部附录ⅤA进行。

2.3干燥减量的测定

按中华人民共和国药典2023年版三部附录ⅦL干燥失重测定法进行。

2.4渗透压的测定

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2023年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。

2.5细菌内毒素的测定

按中华人民共和国药典2023年版三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。

2.6微生物限度的测定

按中华人民共和国药典2023年三部附录ⅫG微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。

2.7细胞生长实验

2.7.1贴壁型细胞生长实验

2.7.1.1方法提纲

1)本实验所用容器具及溶液均为无菌，实验操作过程均为无菌操作。

2)细胞在37℃恒温条件下，在含体积分数3%或10%的小牛血清的细胞培养液中生长72h，观测细胞形态并进行细胞计数；细胞生长72h后，更换不含小牛血清的细胞培养液，继续培养48h，观测细胞形态并进行细胞计数。

2.7.1.2试剂和材料

1)牛血清：符合中华人民共和国药典2023年版三部附录ⅩⅢD。

2)平衡盐溶液：称取氯化钾0.2g，精确至0.01g；无水磷酸二氢钾0.2g，精确至0.01g；氯化钠8.0g，精确至0.01g；无水磷酸氢二钠1.15g，精确至0.001g；加纯化水1000ml，混匀，测pH值，pH值应在7.5±0.3，过滤除菌即得。

3)细胞：vero细胞（或