宏基因组二代测序在血液病患者感染诊断中的应用专家共识（2023版）PPT课件.pptxVIP

宏基因组二代测序技术在血液病患者感染病原诊断中的应用中国专家共识（2023年版）精准诊断新时代的临床指南

目录第一章第二章第三章背景与意义技术原理与方法临床应用指南

目录第四章第五章第六章诊断流程与共识标准优势与挑战结论与实践建议

背景与意义1.

血液病患者感染特点血液病患者因原发病（如白血病、淋巴瘤）或放化疗导致免疫抑制，易发生细菌、真菌、病毒及罕见病原体感染，且感染进展快、病死率高。免疫功能低下由于免疫应答受损，患者常缺乏典型感染症状（如发热、局部炎症），易被原发病掩盖，导致诊断延迟。临床表现不典型感染病原体包括常见细菌（如革兰阴性菌）、耐药菌（如耐碳青霉烯类肠杆菌）、真菌（如曲霉菌、毛霉菌）及病毒（如CMV、EBV），需覆盖广谱检测。病原谱广且复杂

血培养等传统方法受限于样本量、病原体载量及抗生素使用，阳性率不足50%，尤其对苛养菌、厌氧菌及胞内病原体检出困难。阳性率低培养法需数日至数周，如结核分枝杆菌培养需2-8周，延误治疗时机；血清学检测存在窗口期，无法满足急重症需求。耗时长PCR或抗原检测仅针对特定病原体，无法实现未知或混合感染筛查；镜检灵敏度低，依赖操作者经验。覆盖范围窄抗生素使用后病原体活性降低，导致培养假阴性，影响结果准确性。受抗感染治疗干扰传统诊断方法局限性

要点三广谱病原检测mNGS无需预设靶标，可同时检测细菌、真菌、病毒、寄生虫及罕见病原体，尤其适用于混合感染或未知病原体筛查。要点一要点二高通量与快速性一次测序可覆盖数万至百万条序列，24-48小时内出具报告，显著缩短诊断时间，助力早期精准治疗。高灵敏度与特异性即使低载量病原体（如脑脊液中的隐球菌）或难培养微生物（如诺卡菌），mNGS仍可检出，且通过生物信息学分析排除宿主背景干扰。要点三宏基因组测序必要性

技术原理与方法2.

高通量检测宏基因组二代测序（mNGS）通过并行测序技术，可同时对样本中所有微生物（细菌、病毒、真菌、寄生虫等）的核酸进行无偏倚检测，覆盖病原谱广，显著提高检出率。无培养依赖传统微生物培养依赖病原体生长，而mNGS直接提取样本中的核酸，避免了培养耗时和假阴性问题，尤其适用于难培养或苛养病原体。全基因组覆盖mNGS可获取病原体全基因组信息，不仅能鉴定物种，还能分析耐药基因、毒力因子等，为精准抗感染治疗提供依据。混合感染诊断对于血液病患者常见的混合感染，mNGS可一次性检出多种病原体，解决传统方法漏检或难以区分共感染的问题。宏基因组二代测序基础

样本选择与采集优先选择感染部位的标本（如血液、肺泡灌洗液等），需规范采集以避免污染；血液样本建议在抗生素使用前采集以提高阳性率。核酸提取与建库采用高效核酸提取方法（如磁珠法）确保低浓度病原体检出，并通过片段化、接头连接等步骤构建测序文库，适配高通量测序平台。测序质量控制需监控DNA/RNA质量、文库浓度及片段分布，确保测序数据量充足（通常≥20Mreads），避免因宿主核酸占比过高影响灵敏度。010203样本处理与测序流程

宿主序列去除通过比对人类基因组数据库（如hg38）过滤宿主背景序列，提高病原体序列比例，降低数据分析复杂度。病原体数据库比对将剩余序列与综合病原体数据库（如NCBInt/nr、Kraken等）比对，结合算法（如Bowtie2、BLAST）鉴定微生物种类。阈值设定与假阳性控制根据序列数、基因组覆盖度等设定阳性阈值，并通过阴性对照排除背景噪音，确保结果特异性。耐药与毒力分析进一步比对耐药基因库（如CARD）和毒力因子数据库（VFDB），辅助临床评估病原体致病性和治疗选择据分析与生物信息学

临床应用指南3.

适应症与适用场景血液病患者因原发病或治疗导致免疫功能受损，感染风险显著增加，mNGS技术适用于此类患者快速筛查广谱病原体，弥补传统检测灵敏度不足的缺陷。免疫功能低下患者对于长期发热但常规微生物检测阴性的血液病患者，mNGS可通过无偏倚测序覆盖细菌、病毒、真菌及罕见病原体，辅助临床明确感染源。不明原因发热在脓毒症、肺部感染等急危重症场景中，mNGS可缩短病原诊断时间至24-48小时，为早期精准抗感染治疗提供依据。重症感染急症

多技术联合检测建议将mNGS与传统培养、PCR、血清学检测结合使用，通过技术互补提高总体检出率，例如对真菌感染采用G试验/GM试验与mNGS联合验证。动态监测应用对造血干细胞移植后患者建立mNGS定期筛查机制，通过病原体载量变化评估治疗效果或预测感染复发风险。耐药基因分析结合mNGS检测到的耐药基因突变（如碳青霉烯酶基因），指导临床调整抗生素使用方案，实现从病原诊断到治疗决策的全流程优化。标本类型选择针对不同感染部位优化标本采集策略，如血流感染优先检测血浆游离DNA，中枢神经系统感染需采集脑脊液并行细胞学检测辅助判读。诊断路径优化策略