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黄芩中黄酮类成分的提取纯化及其抗炎活性研究

摘要

本研究旨在探讨中药黄芩中黄酮类活性成分的最佳提取纯化工艺，并对其抗炎活性进行初步评价。通过比较不同提取溶剂、提取时间及提取温度对黄酮类成分提取率的影响，采用正交试验优化提取工艺；利用大孔树脂吸附法对提取物进行纯化，结合紫外分光光度法测定总黄酮含量。采用角叉菜胶致小鼠足肿胀模型，考察黄芩黄酮纯化部位的抗炎效果。结果显示，优化后的提取工艺为：70%乙醇为溶剂，料液比1:12，在80℃条件下回流提取2次，每次1.5小时，总黄酮提取率可达较高水平。D101型大孔树脂对黄芩黄酮具有较好的吸附和解吸性能，纯化后总黄酮纯度显著提高。动物实验表明，黄芩黄酮纯化部位能显著抑制小鼠足肿胀度，降低炎症组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平。本研究为黄芩黄酮类成分的进一步开发利用提供了实验依据，其抗炎作用可能与抑制炎症因子释放有关。

关键词：黄芩；黄酮；提取纯化；抗炎；活性研究

引言

黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，是我国传统常用中药，具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。现代药理学研究表明，黄芩的主要有效成分为黄酮类化合物，如黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等，这些成分具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性。其中，抗炎作用是黄芩临床应用的重要基础，但其具体的物质基础和作用机制仍有待深入阐明。

炎症是机体对各种致炎因子引起的损伤所发生的一种以防御反应为主的病理过程。适度的炎症反应有助于清除病原体和修复组织，但过度或持续的炎症则可导致多种慢性疾病的发生发展，如类风湿性关节炎、心血管疾病等。目前临床常用的抗炎药物如非甾体抗炎药（NSAIDs）虽疗效确切，但长期使用易产生胃肠道不良反应及肝肾功能损害。因此，从天然产物中寻找高效、低毒的抗炎活性成分已成为当前药物研发的热点领域。

黄芩中黄酮类成分的提取方法多样，包括水煎煮法、乙醇回流法、超声提取法等。不同提取方法对黄酮类成分的提取效率及活性成分组成可能存在显著影响。乙醇回流法因具有提取效率高、选择性好、操作简便等优点而被广泛应用。纯化工艺是提高有效成分含量、减少杂质干扰的关键步骤，大孔树脂吸附法因其吸附容量大、选择性好、再生简便等特点，在天然产物有效成分的分离纯化中显示出良好的应用前景。

基于此，本研究以黄芩为原料，重点考察乙醇回流提取黄酮类成分的工艺条件，采用大孔树脂进行纯化，并通过动物模型初步评价其抗炎活性，以期为黄芩黄酮类成分的深入研究和开发利用提供科学依据。

1.材料与方法

1.1材料与试剂

黄芩药材购于本地药材市场，经鉴定为唇形科植物黄芩的干燥根。黄芩苷对照品（纯度≥98%）购自中国药品生物制品检定所。乙醇、甲醇、乙酸乙酯等试剂均为分析纯，购自某化学试剂有限公司；所用大孔树脂（D101型、AB-8型、HPD100型）购自某树脂科技有限公司。实验用水为超纯水。

1.2仪器与设备

UV-2600型紫外可见分光光度计（某仪器有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发仪（某生化仪器厂）；SHB-III型循环水式多用真空泵（某仪器设备有限公司）；TDL-5-A型台式离心机（某科学仪器厂）；电子天平（精度0.0001g，某仪器有限公司）；恒温水浴锅（某实验仪器厂）。

1.3实验方法

1.3.1黄酮类成分的提取

1.3.1.1单因素试验：称取一定量黄芩粗粉，分别考察不同乙醇浓度（50%、60%、70%、80%、90%）、提取时间（0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h）、提取温度（60℃、70℃、80℃、90℃、100℃）对黄酮提取率的影响。固定其他条件（料液比1:10，提取2次），测定总黄酮含量，计算提取率。

1.3.1.2正交试验优化：根据单因素试验结果，选取乙醇浓度（A）、提取时间（B）、提取温度（C）为主要影响因素，每个因素设3个水平，采用L9(3^4)正交表进行试验，以总黄酮提取率为评价指标，确定最佳提取工艺。

1.3.2黄酮类成分的纯化

1.3.2.1大孔树脂的筛选：取D101、AB-8、HPD100三种大孔树脂，经预处理后，分别湿法装柱。精密吸取一定量黄芩提取液上样，考察不同树脂对黄酮类成分的静态吸附率和解吸率，筛选最佳树脂型号。

1.3.2.2纯化工艺参数考察：以筛选出的最佳树脂为吸附剂，考察上样量、上样流速、洗脱溶剂浓度及洗脱流速对纯化效果的影响，确定最佳纯化工艺。

1.3.3总黄酮含量测定

采用紫外分光光度法。以黄芩苷为对照品，在278nm波长处测定吸光度。绘制标准曲线，计算样品中总黄酮含量。

标准曲线制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成系列浓度的对照品溶液，测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

样品测定：取适量提取液或纯化液，按标准曲线制备方法处理并测定吸光度，根