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03十二月2025植物生物技术

第一节花粉培养

花粉培养（pollenculture）：是指当花粉发育到一定阶段，从花药中分离出单个花粉粒，接种到培养基上改变正常发育和机能，不经受精作用而发生细胞分裂并诱导单倍体再生植株的方法。花粉培养的意义花粉小孢子发育途径花粉分离方法花粉培养的方法花粉植株形态发生方式花粉植株的再生与驯化移栽影响花粉培养的主要因素2

一、花粉培养的意义花粉培养是细胞工程育种中的重要手段之一。在育种领域花粉培养与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以及转基因技术相结合。是生物技术在农作物育种中应用最广泛、最有成效的方法之一。3

二、花粉小孢子发育途径（一）小孢子的正常发育4

（二）离体培养条件下的小孢子发育离体培养的原始细胞：花粉花粉形成植株的途径称为花粉孢子体发育途径5

根据小孢子第一次有丝分裂的情况将雄核的发育分为：A途径（不均等分裂）：花粉的营养细胞不均等分裂数次有丝分裂花粉粒多细胞团胀破花粉壁胚状体生殖核不参与花粉孢子体的形成B途径（均等分裂）：单核小孢子均等分裂细胞壁将小孢子分隔两个营养型细胞两次分裂多细胞花粉胀破花粉壁胚状体或愈伤组织C途径（不均等分裂、：产生非单倍体植株）已经进行过第一次配子体有丝分裂花粉中营养核与生殖核融合一次分裂花粉植株生殖核和营养核共同参与花粉孢子体的形成。6

三、花粉分离方法取小孢子处于单核中晚期的新鲜材料，接种前先经低温（8~10℃）预处理，然后选用下列方法游离小孢子。（一）机械分离法：单核中期花粉的幼花蕾消毒无菌水冲洗花药培养液挤压花药花粉粒40μm网筛过滤花粉悬浮液500~800r/min离心3min弃上清离心三次花粉密度调整至1*104~5*104个/mL机械分离对花粉造成损伤较大（二）散落花粉法：花药液体培养基悬浮花粉自然释放取走花药。7

四、花粉培养的方法（一）液体培养（二）双层培养法：在琼脂培养基上部加入薄层液体花粉培养液进行培养。可以保持良好湿度，利于花粉生长。（三）看护培养：将单个花粉接种于滤纸上，再置于愈伤组织之上培养。优点是操作简便，成功率高；缺点是不能再显微镜下直接观察。（四）微室培养：将花粉接种于一个由上下两个盖玻片与一金属圈封闭围成的小室内，一定条件下培养。其特点是可以循环供应营养液。最大优点是花粉生长可以尽量少地受到代谢产物积累的影响。花粉培养的方法主要有液体培养、双层培养、看护培养、微室培养。液体浅层培养法：悬浮花粉在培养皿中形成一浅薄膜优点：易于添加新鲜培养基，可以镜检液体悬浮培养法：花粉分散接种于液体培养基中优点：营养吸收和环境条件好，大规模培养。8

五、花粉植株形态发生方式（一）器官发生途径愈伤组织适当比例生长素和细胞分裂素的分化培养基产生芽或根小植株（二）胚状体发生途径胚状体心形期鱼雷期子叶期小植株。9

六、花粉植株的再生