生物化学动物细胞工程制药讲课文档.pptVIP

生物化学动物细胞工程制药;3.1动物细胞的形态和生理特性

3.2生产用动物细胞的要求和获得

3.3动物细胞的培养条件和培养基

3.4动物细胞培养的基本方法

3.5动物细胞大规模培养的方法和操作方式

3.6动物细胞生物反应器

3.7动物细胞产品制造实例

3.8动物细胞制药的前景与展望

;3.1动物细胞的形态和生理特性;（1）成纤维细胞型

形状与体内成纤维细胞形状相似而得名，细胞大致呈梭形或不规则三角形。

（2）上皮细胞型

形状为扁平的不规则多角型。

（3）游走细胞型

在支持物上分散生长，不连接成片，呈活跃的游走和变形运动。

（4）多形性细胞

形态不规则。

;2、悬浮型

少数细胞在培养时呈悬浮生长，来源于血液、淋巴组织的细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞为悬浮型。

形态常为球形，可悬浮培养。

3、兼性贴壁细胞

不严格的依赖支持物

某些情况下可在培养基中良好悬浮生长。;二、动物细胞的生理特征

动物细胞培养的一些基本概念：

动物细胞体外培养可分为原代培养和传代培养（继代培养）。

原代培养是指从机体取出组织或细胞进行初次培养的过程。传代培养是指从原代培养的细胞继续转接培养。

原代培养细胞一经传代后便称为细胞系。

通过选择或克隆形成法从原代培养细胞或细胞系中获得的具有特异性质或标记的细胞，称为细胞株。

不能继续传代或传代次数有限的细胞系或细胞株称为有限细胞系或细胞株。;可连续传代的细胞系或细胞株称为连续细胞系或细胞株。

有限细胞系（株）可通过自发、病毒感染、癌基因转移、与其他连续细胞融合等方法转化得到连续细胞系（株）。

动物细胞的生理特征:

1.细胞分裂周期长（12~48h）

2.细胞生长需贴附基质，存在接触抑制

3.正常二倍体细胞生长寿命有限

;二、动物细胞的生理特征

4.对周围环境十分敏感

5.对培养基要求高

氨基酸、维生素、无机盐、细胞生长因子、贴壁因子、血清等。

6.对蛋白合成途径和修饰与细菌不同（糖基化）

目前???动物细胞和细菌生产的产品，产值约各占一半。;3.2生产用动物细胞的要求和获得;

1986年，从淋巴瘤患者分离转化细胞Namalwa细胞，生产干扰素用于临床。

猴肾转化细胞Vero生产狂犬疫苗和脊髓灰质炎疫苗被批准大量用于人群。

1987年，杂交瘤细胞生产OKT3单抗用于临床排异反应。

1988年后，大批异倍体传代细胞生产的重组蛋白被批准上市。

最终产品残留DNA严格限制。

;二、生产用动物细胞的获得

1 .原代细胞

直接取自动物组织、器官，经粉碎、消化得到的细胞悬液。

需要大量动物。

鸡胚细胞、原代兔肾或鼠肾细胞、血液淋巴细胞。

2.二倍体细胞系

通过筛选、克隆从原代培养细胞中获得的具有某种特征的有限细胞株

有限增殖、2n、贴壁、接触抑制

MRC-5、WI-38;MRC-5：

1966年，14周正常男性胎肺组织中获得

2n=46

寿命42~46代

用于人用疫苗的生产

3、转化细胞系

通过某个转化过程形成，常由于染色体断裂成为异倍体。

自发形成，啮齿动物细胞多发；

病毒感染后转化；

直接从动物肿瘤组织中建立的细胞系。

转化细胞具有无限生命力，一般倍增时间短、对培养条件和生长因子要求较低。

;

CHO（中国仓鼠卵巢细胞）、COS、BHK-21、Namalwa、Vero细胞等。

COS细胞（非洲绿猴肾细胞）：

1981年，Gluzman用复制起点缺失的SV40(猿猴空泡病毒40)转化非洲绿猴肾细胞CV-1，获得3个细胞系：COS-1、COS-3、COS-7。

COS细胞组成性表达SV40大T抗原，带有SV40ori复制子的质粒以附加体的形式高拷贝扩增（105拷