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家兔须毛癣菌型皮肤真菌病相关基因的筛选与功能解析：探索皮肤真菌病发病机制与防治新策略

一、引言

1.1研究背景与意义

家兔须毛癣菌型皮肤真菌病是由须毛癣菌引起的一种常见且危害严重的疾病，在全球养兔业中广泛分布。须毛癣菌作为主要病原菌，对家兔皮肤及毛囊造成严重损害，引发脱毛、红斑、瘙痒和结痂等典型症状。这种疾病不仅影响家兔的生长发育、繁殖性能和皮毛质量，还会导致家兔抵抗力下降，易继发其他感染，给养兔业带来巨大的经济损失。例如，在一些规模化养兔场，一旦暴发须毛癣菌型皮肤真菌病，感染率可达30%-50%，甚至更高，导致幼兔死亡率上升，成兔生长缓慢，养殖成本大幅增加。

从公共卫生角度来看，家兔须毛癣菌型皮肤真菌病是一种人畜共患病，可通过直接接触或间接接触传播给人类，尤其是养兔场工作人员、兽医和宠物爱好者等高危人群。人类感染后，皮肤会出现红斑、丘疹、水疱和瘙痒等症状，不仅影响生活质量，还可能引发其他并发症，如细菌感染等，对人类健康构成潜在威胁。

目前，对于家兔须毛癣菌型皮肤真菌病的防治主要依赖于传统的抗真菌药物和消毒措施，但随着病原菌耐药性的不断增强，这些方法的效果逐渐受到限制。因此，深入了解家兔须毛癣菌型皮肤真菌病的发病机制，筛选与之相关的蛋白编码基因和lncRNAs，对于开发新的诊断方法、治疗策略和预防措施具有重要的理论和实际意义。通过对相关基因的研究，可以揭示疾病发生发展的分子机制，为寻找新的药物靶点和治疗方案提供依据；同时，也有助于开发更加精准、快速的诊断技术，实现疾病的早期诊断和有效防控，从而保障养兔业的健康发展和人类的公共卫生安全。

1.2国内外研究现状

在国外，对家兔皮肤真菌病的研究起步较早，在病原鉴定方面，已明确须毛癣菌、石膏样小孢子菌和犬小孢子菌等是主要致病真菌，并对其形态学、生理学和分子生物学特征进行了深入研究。在致病机制研究上，发现皮肤真菌分泌的酶类如角质酶、蛋白酶等，能够降解皮肤角质层和细胞外基质，促进真菌的侵入和感染；同时，真菌细胞壁蛋白也参与了与宿主细胞的相互作用，影响宿主的免疫应答。在诊断方法上，除了传统的显微镜检查和真菌培养外，还发展了PCR、实时荧光定量PCR和核酸测序等分子生物学技术，提高了诊断的准确性和灵敏度。在防治措施方面，研发了多种抗真菌药物，如伊曲康唑、氟康唑等，并注重环境消毒和饲养管理的改善。

国内对家兔皮肤真菌病的研究也取得了一定进展。在病原学研究上，对国内不同地区的家兔皮肤真菌病病原菌进行了分离鉴定，明确了其种类和分布情况。在致病机制研究中，探讨了宿主皮肤免疫系统对真菌的免疫应答机制，发现先天免疫和获得性免疫在抵抗真菌感染中都发挥着重要作用。诊断技术方面，在借鉴国外先进技术的基础上，也开发了一些适合国内实际情况的检测方法，如多重PCR技术等。在防治方面，除了应用化学药物外，还开展了中草药提取物抗真菌的研究，以及疫苗的研发工作，但目前仍存在一些问题，如药物耐药性、疫苗保护效果不理想等。

1.3研究目的与内容

本研究旨在筛选家兔须毛癣菌型皮肤真菌病相关蛋白编码基因和lncRNAs，并对其功能进行验证，以深入揭示该病的发病机制，为疾病的防治提供新的靶点和理论依据。具体研究内容如下：

构建家兔须毛癣菌型皮肤真菌病模型，通过对模型组和对照组家兔皮肤组织的RNA测序，筛选出差异表达的蛋白编码基因和lncRNAs。

对筛选出的差异表达蛋白编码基因进行功能富集分析，明确其参与的生物学过程、分子功能和信号通路，初步探讨其在疾病发生发展中的作用。

预测差异表达lncRNAs的靶基因，并对其进行功能分析，研究lncRNAs与蛋白编码基因之间的相互作用关系，以及它们在疾病中的调控机制。

采用qRT-PCR、Westernblot和免疫组化等技术，对筛选出的关键蛋白编码基因和lncRNAs进行表达验证，进一步确认其在疾病模型中的差异表达情况。

通过细胞实验和动物实验，对关键基因和lncRNAs的功能进行验证，研究它们对家兔表皮角化细胞炎症反应、免疫应答以及疾病进程的影响，明确其在疾病发生发展中的具体作用机制。

1.4技术路线

本研究技术路线如图1-1所示：

模型构建：选取健康家兔，随机分为模型组和对照组。模型组家兔皮肤接种须毛癣菌，对照组接种无菌生理盐水。接种后定期观察家兔皮肤症状，采集皮肤组织样本，通过真菌培养、显微镜检查和组织病理学分析等方法，确认模型构建成功。

基因筛选：提取模型组和对照组家兔皮肤组织的总RNA，进行质量检测和文库构建，然后进行RNA测序。对测序数据进行分析，筛选出差异表达的蛋白编码基因和lncRNAs。

功能验证：对筛选出的差异表达基因进行功能富集分析和靶基因预测。采用qRT-PCR、Westernblot