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２０２５年５月Ｖｏｌ．４３Ｎｏ．５

Ｍａｙ２０２５ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ５０８～５１７

研究论文ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０２４．１１０１３

尿液细胞外囊泡的高效亲和纯化捕获与蛋白质组学分析

１，２，３＃２＃４１，２∗

张贵元，詹震，陶纬国，张昊

（１．东南大学生物科学与医学工程学院，江苏南京２１００９６；２．逸微健华生物科技有限公司，江苏南京２１００３２；

３．南京紫金山分子医学技术研究院，江苏南京２１００３２；４．普渡大学生物化学系，印第安纳州西拉法叶４７９０７）

摘要：目前，液体活检因其创伤小、易获取且操作简便的优点，已成为癌症诊断中传统组织活检的替代方法。尿液

来源的细胞外囊泡（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓ，ＥＶｓ）已被确定为癌症生物标志物的重要来源。ＥＶｓ是由细胞分泌的磷

脂双分子层囊泡，内含蛋白质、ＤＮＡ及ＲＮＡ等成分，且由于双层磷脂膜的保护，ＥＶｓ内的蛋白质可免受体液中酶的

降解。然而，在蛋白质组学分析中，低产率使得从生物体液中分离ＥＶｓ仍是一个挑战。在本研究中，我们采用亲和

磁珠ＥＶｌｅｎｔ对尿液中的ＥＶｓ进行富集，ＥＶｌｅｎｔ通过识别ＥＶｓ表面的特异性蛋白质实现高选择性富集。首先使用

蛋白免疫印迹、纳米粒子追踪分析和透射电子显微镜对尿液中的ＥＶｓ进行综合表征，结果表明，ＥＶｌｅｎｔ亲和磁珠成

功的从尿液中分离出了ＥＶｓ，且富集效果优于传统的超速离心方法。接下来，将此方法应用于１５例健康志愿者和

１５例前列腺癌患者的尿液ＥＶｓ蛋白质组学分析，并筛选潜在的肿瘤标志物。结果显示，健康对照组平均鉴定出

２０３９种蛋白质和１４４９０条肽段，前列腺癌患者中分别鉴定出１９８２种蛋白质和１３１００条肽段。进一步分析发现，

９１种蛋白质属于Ｖｅｓｉｃｌｅｐｅｄｉａ数据库中最常见的１００种ＥＶ蛋白质。与健康对照组相比，前列腺癌患者尿液ＥＶｓ

中８８种蛋白质表达上调，９０种蛋白质下调。ＫＥＧＧ分析揭示４种蛋白质（尿激酶型纤溶酶原激活剂（ＰＬＡＵ）、血小

板衍生生长因子Ａ（ＰＤＧＦＡ）、基质金属蛋白酶３（ＭＭＰ３）和神经母细胞瘤ＲＡＳ病毒癌基因同源物（ＮＲＡＳ））在前

列腺癌通路中富集，这些蛋白质未来有希望作为前列腺癌的潜在生物标志物，可以为前列腺癌的早期诊断及预后

提供重要依据。

关键词：细胞外囊泡；尿液；蛋白质组学；前列腺癌；亲和纯化

中图分类号：Ｏ６５８文献标识码：Ａ

Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｃａｐｔｕｒｅａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｕｒｉｎａｒｙ

ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓｂｙａｆｆｉｎｉｔｙｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ

１，２，３＃２＃４１，２∗

ＺＨＡＮＧＧｕｉｙｕａｎ，ＺＨＡＮＺｈｅｎ，ＴＡＯＷｅｉｇｕｏ，ＺＨＡＮＧＨａｏ

（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆ＭｅｄｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２