2025年环境工程微生物学综合练习题期末实验设计与菌种鉴定.docxVIP

2025年环境工程微生物学综合练习题期末实验设计与菌种鉴定

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、

简述在环境微生物学研究中，进行微生物分离纯化的目的和基本原则。若要从一桶富含多种细菌的污水中分离得到能高效降解石油烃的纯菌株，请设计一个初步的实验思路，包括至少三个关键步骤及其选择依据。

二、

革兰氏染色是环境微生物学中最常用的初步鉴定方法。请简述革兰氏染色的基本原理。一个环境样品经革兰氏染色后，观察到两种不同形态的菌落：一种为革兰氏阴性杆状菌，另一种为革兰氏阳性球菌。请分别列举每种菌可能具有的几种典型生理生化特性，并说明这些特性对于区分它们或进一步鉴定可能起到的作用。

三、

在进行环境样品中目标微生物的富集培养时，选择性培养基的应用至关重要。请简述选择性培养基的原理。假设你需要从城市污水污泥中筛选能耐受高浓度重金属（如铅）的细菌，请列举至少三种可以用于该筛选目的的选择性培养基成分，并简述其作用原理。

四、

设计一个实验方案，用于测定某纯培养微生物在不同浓度（如0,10,50,100mg/L）的某种有机污染物（如草甘膦）存在下生长情况。请列出该实验需要设置的关键组别（对照组和实验组），简述每组应如何操作，并说明你将采用什么指标来评价该微生物对草甘膦的抗性。

五、

16SrRNA基因序列分析是当前环境微生物鉴定的主流方法。请简述利用16SrRNA基因序列进行微生物鉴定的基本流程。如果在序列比对时，目标微生物与数据库中某个已知物种的序列相似度低于95%，你对此结果应如何解读？并简述可能的原因。

六、

从一株未知环境细菌中提取基因组DNA时，通常需要对环境样品进行预处理。请简述从水样中提取DNA时，进行样品预处理的必要性，并列举至少三种常用的预处理步骤及其目的。

七、

某研究小组从受石油污染的土壤中分离到一株疑似能降解苯酚的细菌。他们设计了如下实验进行初步验证：将菌株接种于含有苯酚的培养基中培养，同时设置不含苯酚的对照培养基。请分析该实验设计的不足之处，并提出至少一条改进建议。

八、

在实际的环境微生物鉴定工作中，常常会用到生化鉴定系统（如API系统）。请简述这类生化鉴定系统的原理及其在微生物鉴定中的作用。如果你获得的某株细菌只完成了部分API测试，得到了一个部分编号，但结果无法明确鉴定到种，你还可以采取哪些补充鉴定方法？

九、

假设你通过实验设计分离纯化得到一株新的、能高效降解水中氯代有机溶剂（如TCE）的假说菌种。请设计一个简要的实验流程，用于初步判断该菌株的降解机制是否涉及特定的酶促反应（例如，是否可能涉及加氢酶或脱卤酶）。

十、

综合实验设计与菌种鉴定两个方面，谈谈在进行环境微生物学研究时，选择合适的鉴定方法（形态学、生理生化、分子生物学等）需要考虑哪些因素？并举例说明在什么情况下优先选择哪种鉴定方法。

试卷答案

一、

目的：分离纯化旨在从混合的微生物群落中获得单一的、纯培养的微生物菌株，以便于对其进行进一步的生理、生化特性研究、遗传改良或应用开发。基本原则包括：选择合适的培养基、采用适当的稀释方法降低微生物浓度、利用物理或化学方法抑制非目标微生物的生长、通过系列稀释和划线分离等方法获得单菌落。

实验思路：

1.样品预处理与富集：取污水样品，根据石油烃浓度适当稀释。选择含有石油烃作为唯一碳源或限制性碳源的选择性培养基（如添加石油烃的R2A培养基或改良的Luria-Bertani培养基），进行富集培养，以增加目标降解菌的比例。

2.平板分离：将富集液进行系列稀释。取适量稀释液涂布或倾注在含有石油烃的选择性固体培养基上。通过平板划线法或系列稀释平板法，将微生物接种到琼脂表面，使细胞分散成单菌落。

3.纯化与验证：在选择性培养基上挑选形态一致、生长良好的单菌落，进行重复划线分离，直至获得纯培养物。可通过显微镜观察菌体形态、革兰氏染色，以及接种到基础培养基上观察生长情况等方式初步验证其纯度。

二、

基本原理：革兰氏染色利用细菌细胞壁成分（主要是肽聚糖结构）的差异性，通过结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色、复红复染等步骤，使革兰氏阳性菌（细胞壁厚、肽聚糖层多）保留初染剂颜色呈紫色，而革兰氏阴性菌（细胞壁薄、肽聚糖层少、外膜存在）被乙醇脱色后呈红色或粉色。

生理生化特性举例及作用：

革兰氏阴性杆状菌：可能具有氧化酶阳性、接触酶阳性、能利用葡萄糖产酸产气、动力阳性等特性。这些特性有助于与其他阴性菌（如氧化酶阴性）或阳性菌区分。

革兰氏阳性球菌：可能具有马伦氏反应阳性（如金黄色葡萄球菌）、凝固酶试验阳性（如金黄色葡萄球菌）、触酶阳性（如链球菌属）、无动力等特性。这些特性有助于区分链球菌属与葡萄球菌属，或与其他类型细菌区分。

这些特性是初步鉴定的关键线索，可缩小鉴定