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高性能液相色谱仪操作及维护指南

引言

高性能液相色谱仪（HPLC）作为现代分析实验室中不可或缺的关键设备，凭借其卓越的分离效能、高灵敏度及广泛的适用性，在制药、化工、环境监测、食品安全等诸多领域发挥着至关重要的作用。能否准确、高效地运用HPLC获取可靠数据，不仅取决于仪器本身的性能，更与操作人员的专业素养、规范的操作流程以及细致的日常维护密不可分。本指南旨在结合实践经验，系统阐述HPLC的标准化操作步骤与科学维护要点，以期为实验室人员提供具有实际指导意义的参考，确保仪器长期处于良好运行状态，保障分析结果的准确性与重现性。

一、操作流程详解

1.1开机前准备与检查

开机前的细致准备是确保实验顺利进行的第一道防线。首先，应确认实验室环境条件，温度宜控制在15-30℃，相对湿度一般不超过80%，避免剧烈的温湿度波动及强电磁干扰。

流动相的准备与处理尤为关键。根据实验方法要求选择合适的溶剂，务必使用色谱纯级别，并确保其在有效期内。若流动相为混合溶剂，需按比例精确配制，混合均匀。对于含水或缓冲盐的流动相，必须经0.45μm（或更小孔径，视色谱柱要求而定）滤膜减压过滤，以去除微小颗粒杂质，保护色谱柱和泵。过滤后的流动相需进行超声脱气处理，通常超声10-15分钟，以消除溶解的空气，防止泵产生气穴现象及检测器基线噪音增大。值得注意的是，磷酸盐等缓冲盐溶液应现配现用，避免长期放置产生沉淀或微生物滋生。

样品的预处理同样不容忽视。样品溶液应澄清，若有悬浮物需经0.45μm滤膜（针对水系样品）或相应孔径的滤膜过滤。对于浓度过高的样品，需进行适当稀释，以防色谱柱过载或污染。

检查仪器各部件连接是否紧密，特别是输液管路、色谱柱与检测器之间的接头，确保无松动或漏液迹象。色谱柱的选择应与实验方法匹配，安装时注意流向标识。

1.2开机与系统平衡

接通仪器电源，依次开启泵、柱温箱（若使用）、检测器等模块，最后打开工作站软件。待各硬件自检完成后，在工作站中确认各模块通讯正常。

在泵控制界面设置流动相流速，初始流速可设为方法流速的一半或更低，缓慢升高至设定值，避免瞬间高压冲击色谱柱。同时设定柱温箱温度（若使用）及检测器参数（如波长、增益等）。

启动泵，让流动相在设定流速下流经色谱系统。系统平衡是获得稳定保留时间和良好峰形的前提，平衡时间长短取决于色谱柱类型、流动相组成及前次实验残留情况。对于反相色谱柱，若流动相未变，通常平衡15-30分钟即可；若更换了流动相或色谱柱，则需要更长时间，直至基线平稳。可通过观察检测器基线的漂移和噪音水平来判断平衡是否达到要求。

1.3方法编辑与样品分析

在工作站软件中编辑或调用已保存的分析方法，方法应包含流动相组成及比例（或梯度洗脱程序）、流速、柱温、检测波长、进样量、运行时间等关键参数。

待系统充分平衡后，即可进行样品分析。进样前，需用样品溶液润洗进样针或自动进样器的样品环数次，以消除残留干扰。对于手动进样，应掌握正确的进样手法，确保进样准确、迅速。自动进样器则需检查样品盘位置是否正确，样品瓶是否放置稳妥，瓶盖是否旋紧（防止样品挥发或污染）。

依次注入空白溶剂（或流动相）、标准品溶液和样品溶液。每针进样后，工作站将自动采集并记录色谱图数据。实验过程中，应密切关注仪器运行状态，包括压力是否稳定、基线是否正常、有无漏液等情况。若发现异常，应立即停止实验，排查原因并解决后方可继续。

1.4实验结束后操作

样品分析完毕，需进行仪器的清洁与关机操作。首先，应使用适当的溶剂冲洗色谱系统。若流动相为纯有机溶剂，可直接用该溶剂继续冲洗10-15分钟；若流动相中含有缓冲盐，则必须先用不含盐的过渡溶剂（如与水相比例相同的甲醇-水或乙腈-水）冲洗系统，直至管路和色谱柱中的盐完全被冲洗干净（通常需要至少30分钟，或冲洗体积达到色谱柱体积的20倍以上），以防盐析堵塞色谱柱或损坏泵。

冲洗完成后，关闭泵，然后依次关闭检测器、柱温箱等模块电源，最后关闭工作站软件和主机电源。

及时清理实验台面，处理废液。实验数据应妥善保存，并进行初步的结果审核。

二、仪器维护保养

2.1日常维护

日常维护是延长仪器寿命、保证分析性能的基础。

流动相相关：溶剂瓶需定期清洗，特别是使用含盐流动相后，以防止微生物滋生和杂质沉积。建议每周至少清洗一次，清洗后用纯水冲洗干净，晾干或用有机溶剂润洗后存放。溶剂过滤器的滤膜也需定期检查和更换，若发现堵塞或污染应立即更换。

泵系统：每天实验结束后，按前述步骤彻底冲洗泵和管路。单向阀是泵的核心部件，若发现压力不稳或流量不准，可能是单向阀污染或磨损，可按照仪器手册进行清洗或更换。密封圈等易损件也需根据使用情况定期更换。

进样器：手动进样器的转子密封垫是易损件，频繁使用后可能出现漏液或进样重复性差，应定期检查和更换。自动进样器的进样针、样品环